细胞名称：NCI-H226H226人肺鳞癌细胞ATCC

细胞代次：P4

细胞规格：T25瓶（包邮）/2冷冻管（需加干冰运输费）

细胞冻存：无血清冻存液

细胞传代：第一次建议1:2

细胞收到后处理

培养至良好状态后灌满培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO₂的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶的培养基，另外一瓶用自己配的培养基，以便进行对比培养）

培养步骤

细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的培养液收集至离心管中，留5ml培养基，放入37℃、5%CO₂孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下细胞传代：

A1、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。

A2、悬浮细胞冻存：

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，将T25 培养瓶中的悬液收集至离心管中1000rpm

离心5min；

2、弃上清，沉淀细胞加入1ml/支的雅吉生物无血清冻存液（C7001），混匀后加入冻存管中。（如：冻一支，加入 1ml 无血清冻存液即可）

3、将冻存细胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱存

放 24 小时以上。

B1、对于贴壁细胞，传代可参考如下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 添加0.25%消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，使之脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO₂的细胞培养箱中培养。

B2、贴壁细胞冻存：

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2、添加0.25%消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；

3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。

细胞复苏：

1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3、弃上清，沉淀用5ml培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO₂细胞培养箱中培养；

4、第二天，换用新鲜培养基继续培养。

注意事项：有些细胞比较特殊，如贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正常现象。请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入消化液1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂细胞培养箱中培养。

售后服务告知书

1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？

1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；

3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；

4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；

5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；

6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。

二）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？

1. 客户造成细胞污染，不重发；

2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；

3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；

4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；

5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；

6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；

7. 视具体情况而定。

YS642CTca-8113人舌鳞癌细胞

YS643CTF-1人血液白血病细胞

YS644C白血病THP-1人单核细胞

YS645CTM3小鼠睾丸间质细胞

YS646CU-2OS[U2OS]人骨肉瘤细胞

YS647CU251人胶质瘤细胞

YS648CU-937淋巴瘤细胞人组织细胞

YS649CV79仓鼠肺细胞

YS650CVero非洲绿猴肾细胞

YS651CWI-38人胚肺细胞

YS652CY1[Y-1]小鼠肾上腺皮质瘤细胞

YS653C801-D[PLA-801D]性肺癌细胞人巨细胞

YS654CMC3T3-E1Subclone24前体细胞小鼠胚胎成骨细胞

YS655CA875[A-875]人黑色素瘤细胞

YS656CL6565小鼠白血病克隆细胞

YS657CCAL27人舌鳞癌细胞

YS658CCW-2人结肠腺癌细胞

YS659CEJ-1人膀胱癌细胞

YS660C（高分化）HCC94[HCC941122]人子宫鳞癌细胞

YS661CNCI-H460[H460]肺癌细胞人大细胞

YS662CM-NFS-60[NFS-60]/小鼠白血病G-CSF依赖性细胞小鼠髓性白血病淋巴细胞

YS663CA7r5大鼠胸大动脉平滑肌细胞

YS664CB16-F10小鼠皮肤黑色素瘤细胞

YS665CBeta-TC-6小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞

YS667CCalu-6人退行性癌细胞

YS668CCEM/C1白血病细胞人急性淋巴细胞

YS669CChangliver人张氏肝细胞

YS670CFO小鼠骨髓瘤细胞

YS671ChFOB1.19人SV40转染成骨细胞

YS673CJ774A.1小鼠单核巨噬细胞

YS674CK7M2wt[K7M2-WT]小鼠骨肉瘤成骨细胞

YS675CKATOIII[KATO3]人胃癌细胞

YS676CLWnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞

YS677C亚克隆14MC3T3-E1Subclone14小鼠颅顶前骨细胞

YS678CMDA-MB-415人乳腺癌细胞

YS679CMDA-MB-436人乳腺癌细胞

YS680CNCI-H226[H226]人肺鳞癌细胞

YS681CNCI-H358肺癌细胞人非小细胞

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