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修饰蛋白质组学
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详细信息
实验介绍
蛋白翻译后修饰（post-translation modifications,PTM）是指对翻译后的蛋白质进行共价加工的过程，通过在一个或多个氨基酸残基加上修饰基团，可以改变蛋白质的理化性质，进而影响蛋白质的空间构象和活性状态，亚细胞定位，折叠机器稳定性及蛋白互作。蛋白质发生翻译后修饰时其分子质量会发生相应的改变，通过质谱能够精确测定蛋白质的分子质量，但是含量低且动态范围大，需要针对不同修饰类型采用相应富集方法。常见的蛋白翻译后修饰主要有磷酸化、乙酰化、糖基化和泛素化等。
实验流程
分类：
蛋白翻译后修饰位点鉴定：IP获得目的蛋白，SDS-PAGE分离纯化目的蛋白，在经过LC-MS/MS质谱，数据库检索得到蛋白上的修饰位点。
磷酸化蛋白质组鉴定：采用主流的TiO2/IMAC富集方法，特异性高，富集效率好。
琥珀酰化蛋白质组鉴定：通过高分辨率、高扫描速度的质谱，对富集的琥珀酰化肽段进行大规模鉴定。
巴豆酰化蛋白质组鉴定：采用化学性质稳定巴豆酰化树脂IP的方法，鉴定样品中发生巴豆酰化的蛋白质以及相应的巴豆酰化位点。
糖基化蛋白质组鉴定：采用主流凝集素亲和法富集N-糖基化肽段，旨在揭示蛋白质的调节功能。
乙酰化蛋白质组鉴定：可用于药物作用靶点、疾病标志物筛选、植物胁迫/抗逆、作用机制等方面的研究。
优势：
（1）高特异性的修饰抗体
（2）高分辨率、高灵敏度质谱仪
（3）鉴定通量高
（4）可与代谢组学等进行多组学联合分析
