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A0604 2XRAPA HiFi PCR Mix试剂

型号
A0604
参数
供货周期:现货 规格:1ml/10ml 货号:A0604 应用领域:医疗卫生,化工,生物产业,制药,综合 主要用途:科研实验
上海雅吉生物科技有限公司

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上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科学领域,提供科研类试剂、耗材、仪器、技术服务的生物企业。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学等 。旗下拥有 “雅吉生物”、“晶风生物”、“彩佑实业”、“GTX” 品牌。通过公司各部门员工的共同努力在行业内享有一定的声誉,深得新老客户厚爱。本着“服务、诚信、进取”的精神,坚持沟通你我,创新服务,为国内外广大用户提供产品和服务。


       雅吉生物专营ATCC细胞,种类齐全,服务周到,欢迎新老客户咨询订购。ATCC成立于1925年,是很大的生物资源中心,由美国14家生化、医学类行业协会组成的理事会负责管理,是一家非盈利生物标准品资源中心。ATCC发布其获取、鉴定、保存及开发的生物标准品,推动科学研究的验证,应用及进步。


目前,ATCC可以提供以下类别生物标准品:细胞株(3000多种);菌株(15000多种);动植物病毒株(2500多种)以及重组物质等。

 

      本公司郑重承诺:质量稳定、供货及时。

 

详细信息

2XRAPA HiFi PCR Mix试剂其来源于高保真DNA聚合酶,并加入了Sso7d延伸结合域,能够提高反应速度、保真度和稳定性。该HiFi PCR Mix为单酶制品,不含其它DNA聚合酶,具有超保真扩增性能(~280倍Taq)、长片段扩增能力、高产量等优势。RAPA HiFi DNA聚合酶在保真性方面与Q5 DNA聚合酶相似,在优化的反应缓冲液中,RAPA HiFi PCR Mix在长片段扩增、产量、成功率方面要超过Q5 PCR Mix。使用该酶可轻松扩增8kb的基因组片段,20kb的λ DNA,8kb的cDNA。RAPA HiFi DNA聚合酶具有6kb/min以上的扩增速度。对于常规或GC含量≤ 65%的复杂模板,使用该制品可以进行可靠的、的扩增。对于高GC含量的模板(>65%),添加5×Q-Solution(Cat. No.: A3002)确保最大的扩增性能。该HiFi PCR Mix具有5'-3'的聚合酶活性、3'-5'的强外切酶活性,产物为平末端。

特征

  • 超保真扩增:~280倍Taq的保真性能,是载体构建、点突变、NGS模板扩增、基因合成的最佳用酶。

  • 快速扩增:具有6kb/min的扩增能力。

  • 长片段扩增:质粒、λ DNA 等简单模板可以有效扩增>20 kb,基因组可以有效扩增>8 kb,cDNA可以有效扩增>8kb。

储存

长期储存置于-20°C以下,可保存2年,避免反复冻融;短期使用置于4°C(3个月)保存,一经融化后请放置于4°C,勿再冻存。

反应实例

1. 长片段扩增能力
分别以λDNA、human gDNA、human cDNA为模板,使用RAPA HIFI PCR Mix进行扩增,循环数统一为28 cycles,结果如上图所示,对于不同种类DNA模板的长片段靶基因,RAPA HIFI PCR Mix均有良好的扩增性能。

常见问题及解决方案:

无扩增或产量低循环数
退火温度
模板DNA纯度和用量
延伸时间
引物用量
引物设计
增加循环数至35~40cycles
以2℃为单位降低退火温度
使用高纯度的模板DNA,使用合适的模板量。
适当增加延伸时间
在0.1μM~0.5μM之间选取合适的引物量
重新设计优化引物
出现杂带或Smear退火温度
引物浓度
循环数
模板DNA使用量
引物

以2℃为单位提高退火温度
降低引物浓度至0.2μM
降低循环数至25~28cycles
使用合适的模板量,不要过多使用
重新设计优化引物

2XRAPA HiFi PCR Mix试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1:A3825-01 红黄变色反应(肉眼观察)

以 体外转录 RNA 为模板,1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起始前,下图为 65 度反应 30min 后。

图4.jpg

应用实例2:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。

b852504c757107ec2ac02ece1e368206.jpg

应用实例3: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

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规格 1ml/10ml
货号 A0604
应用领域 医疗卫生,化工,生物产业,制药,综合
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