大鼠骨髓来源的内皮祖细胞体外培养
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伊莱博生物科技（上海）有限公司，公司总部位于上海长江软件园。2024年1月与上海大学医学院成立联合研究中心，主要以生命科学研究为基础，专注于研究成果转化及技术服务创新，建立了包含肿瘤生物学、病理学、免疫学、细胞生物学、生物化学与分子生物学以及动物实验等学科的研究服务体系，为医学领域的发展做出了重要贡献。
目前已建成并投入使用的实验室面积近2800平方米，包含基础实验平台、组学实验平台以及动物实验平台，基本能够满足科研课题研究的全流程。
伊莱博生物拥有专业的技术支持和实验操作人员团队，核心成员来自中科院、复旦、交大、同济等国内重点高校及科研机构，能够提供前沿的、完善的实验技术咨询与服务。
为了响应国家大力发展基础研究的号召，推动实验科学领域的进步，伊莱博生物充分利用积累多年的科研资源优势，为广大科研工作者提供实验技术培训服务，从理论和实操两个部分，培养其科研思维以及解决问题的能力，为今后的科研工作奠定坚实的基础。
详细信息
1. SD大鼠，250g，通过颈椎脱位处死大鼠，浸入75%乙醇浸泡5分钟，转移到通风柜中的解剖盘中。
2. 打开皮肤，暴露、收集股骨，无菌状态下移除附着的肌肉和组织。
3. 并转移股骨至预冷含双抗的PBS中，洗涤三次。冰上操作。
4. 切断股骨骨骺， 使用5mlPBS，1ml注射器针头冲洗，冲洗液由棕色变成粉红色即可（股骨变白）。冲洗后，用1ml注射器吹打3-5次。
5. 70um滤网过滤，弃去筛网。使用 15ml 离心管，先加入分离液，然后缓慢加入滤过的悬液。20℃环境下，600g 离心 25min。
6. 离心后，离心管中液体由上至下分为四层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色单个核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
7. 小心吸取离心管中的，环状乳白色单个核细胞层，转移到新离心管中，加入 5-10ml 洗涤液，混匀细胞。400g，离心 10min。
8. 弃去上清，用吸管吸取 5ml 清洗液重悬所得细胞。 250g，离心 10min，弃去上清。 再用M199wq培养基（含10 ng/mL VEGF，1 ng/mL b-FGF，1 ng/mL EGF，20%胎牛血清、1%双抗）清洗一次，弃去上清，M199wq培养基重悬细胞。250g，离心 10min，弃去上清。M199wq培养基重悬细胞，计数。
9. 按3×106/孔种入纤连蛋白包被过的24孔板，每3天换一次培养基，以去除非贴壁细胞，持续诱导培养2-3周。
