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N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG)试剂盒
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代理商上海牧荣生物科技有限公司 是一家专注于分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗、临床应用等领域,以销售为主的生物技术公司。销售的产品涉及,细胞株和菌株、胎牛血清、生化试剂、ELISA试剂盒、抗体和抗原、细胞因子、技术服务、实验耗材和消耗品、仪器设备等。客户遍布大学、研究所、医院、卫生防疫、商品检验检疫、制药公司、生物技术公司和食品工业等单位。公司与国内外生物试剂供应商保持着密切的合作关系,有着非常好的货源渠道, 可以在为用户提供前沿和完备的产品和物流服务。
公司的目标成为中国生命科学和生物技术等领域坚强的后盾,为这些领域的发展提供服务。以“质量是企业的生命,诚信是经营的资本”为警醒 ,严把所售出商品的质量关,不做任何有损顾客利益的事情。
公司代理国内外众多生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品,公司坚持“一站式”服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。
公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。
公司的经营理念:发展依靠人、发展适应人,发展为了人、发展培养人
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N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG)试剂盒
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
NAG是溶酶体中的一种酸性水解酶,广泛存在于各种组织、体液和细胞中,以前列腺和肾近曲小管细胞内含量最高。NAG活性变化与机体某些病理状态密切相关。
测定原理:
NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。
自备用品:
酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入2.5mL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二:液体4mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体13mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
酶标仪或分光光度计预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。
2、样本测定(在EP管或96孔板中依次加入下列试剂):
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
试剂一 | 25 | |
蒸馏水 | 25 | |
试剂二 | 35 | 35 |
样本 | 10 | 10 |
迅速混匀,放入37℃保温30min
试剂三 | 130 | 130 |
充分混匀, 400nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。
NAG活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.00585x +0.0083;x为标准品浓度(nmol/mL),y为吸光值。
2、血清(浆)NAG活力的计算
单位的定义:每mL血清(浆)每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反总]÷V样÷T =39.89×(ΔA-0.0083)
3、细胞、细菌和组织中NAG活力的计算
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=39.89×(ΔA-0.0083) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min/g鲜重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T
=39.89×(ΔA-0.0083)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T
=0.08×(ΔA-0.0083)
V反总:反应体系总体积,0.07mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 500:细胞或细菌总数,500万;T:反应时间,30min。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.0039x +0.0083;x为标准品浓度(nmol/mL),y为吸光值。
2、血清(浆)NAG活力的计算
单位的定义:每mL血清(浆)每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反总]÷V样÷T =59.83×(ΔA-0.0083)
3、细胞、细菌和组织中NAG活力的计算
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=59.83×(ΔA-0.0083) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min/g鲜重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T
=59.83×(ΔA-0.0083)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T
=0.12×(ΔA-0.0083)
V反总:反应体系总体积,0.07mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 500:细胞或细菌总数,500万;T:反应时间,30min。
上海牧荣生物科技有限公司
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N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG)试剂盒