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BB-46075 组织过氧亚硝基阴离子检测(ONOO)绿色
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试剂准备:
根据样本数量,用纯水将O08探针10倍稀释。充分混匀,备用。
样本处理:
1. 刚取得的新鲜组织样本用PBS洗净。
2. 准确称取50 mg或100 mg组织样本,加入500 μl-1 ml匀浆缓冲液A,用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
3. 在100×g,4℃离心5分钟,取上清备用。
样本检测:
1. 在96孔板中加入190微升匀浆上清液、10微升O08探针,用移液器吹打,使之充分混匀。
2. 在37℃避光孵育20-30分钟。
3. 置于酶标仪中,激发波长为488-535 nm、发射波长606 nm检测荧光强度。
蛋白定量:
1. 另取50微升上清匀浆液,用PBS大约稀释30倍。
2. 取100微升进行蛋白定量。
结果处理:
以荧光强度(RFU)/蛋白浓度(毫克蛋白)表示组织活性氧强度。