细胞培养细胞生物学实验外包CCK8技术服务

WST-8在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的 formazan (参考图1)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

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1.通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要，进行培养并给予药物刺激。

推荐操作：通常建议培养板边孔不用于实验，仅加入100μL的培养基以减少培养过程中蒸发的影响

2.每孔加入10微升增强型CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200微升，则需加入20微升增强型CCK-8溶液，其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和增强型CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和增强型CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。

推荐操作：检测前，用新鲜的培养基或不含血清的培养将CCK-8按1:10（CCK-8试剂：培养基）稀释，混匀配成CCK-8工作液。然后吸去培养孔中的培养上清，加入稀释好的CCK-8工作液，100μL/孔。此操作可减少重复样本间的误差。

3.在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

4.在450nm测定吸光度。可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。

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