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自诱导LB培养基Auto Induction Medium
中级会员第5年
代理商ClodronateLiposomes.com.cn是靶点科技(北京)有限公司(Target Technology (Beijing) Co.,Ltd.)旗下专注于单核巨噬细胞系统的专业性门户网站。
ClodronateLiposomes.com.cn以单核巨噬细胞系统为切入点和核心点,旨在建立和提供一个专业性,实验性,多层次,多维度的综合性免疫学平台。平台基于自主知识产权的TargoSome®(脂质体靶向技术),TargoNano®(纳米靶向技术),TargoChem®(化合物靶向技术),TargoAnti®(抗体靶向技术)研发了靶向单核巨噬细胞系统的*准递送方案。研发团队引进开发*前沿的超声打断技术,以达到脂质体的均质化;引进开发*前沿的过滤截留技术,以达到脂质体的筛选化;引进开发*前沿的冻干存储技术,以达到脂质体的长效化。在脂质体开发的经验上,为丰富产品线,引入纳米,小分子化合物和抗体类产品。
平台在强化“Bench-to-Bedside”基础产品开发的同时,为了更好的给目标客户赋能,提供常用大小鼠模拟的人类疾病模型的构建服务,同时,不定期举行实验性的主题培训班,让客户能获得自己独立动手的实验能力。此外,平台出版免费电子期刊,以促进实验和文献的交流共享。
平台团队对单核巨噬细胞系统有着深刻的认识和理解,从分离,富集,鉴定,示踪,培养和细胞清除提供一整套综合解决方案。专业的技术支持团队,确保能够为客户给予专业的售前咨询和售后服务。
基于对靶点科技的认同,被受邀成为荷兰(LIPOSOMA)ClodronateLiposomes.com在国内的授权代理商。ClodronateLiposomes是由荷兰阿姆斯特丹Vrije University Medical Center(VUMC) 的Nico van Rooijen教授研发创立。Nico van Rooijen是著名免疫学家,在单核巨噬细胞领域,做了很多开创性的基础工作,受人尊敬。
ClodronateLiposomes.com.cn始终秉承“Bench-to-Bedside”的出发点,“专业和专注“的服务宗旨,以“Hit Your Target®”为目标,将为实现这一美好愿景而奋斗。
背景原理
自诱导培养基Auto Induction Medium(AIM),包含LB Broth (AIM), 2x YT Broth (AIM), Terrific Broth (AIM), Super Broth (AIM)。通常,外源蛋白在细菌中表达时常使用IPTG诱导的启动子,如Lac启动子。当细胞密度达到理想值时,通过向培养基中加入IPTG的方法诱导蛋白表达。使用这个自动诱导培养基,不再需要监测细胞密度和添加IPTG。葡萄糖作为半乳糖操纵子的阻遏因子阻止细菌利用α-乳糖,而被优先代谢,促进高密度生长。一旦培养基中的葡萄糖被耗尽(通常发生在对数期的后期),乳糖被ß-半乳糖苷酶转换成异乳糖(葡萄糖-1,6-半乳糖),而后者作为IPTG诱导型启动子的诱导剂,引起乳糖阻遏子从与DNA结合的位点上释放,启动重组蛋白的表达。对于DE3基因型的E.coli中,异乳糖使T7lac启动子去阻遏,并诱导lacUV5启动子表达T7 RNA聚合酶。通过这种方式,在细菌培养物生长到某一特定点时蛋白表达自发开始,省掉了监测细胞密度(OD600)和添加IPTG这两个步骤。与传统IPTG诱导的蛋白表达过程相比,使用自动诱导培养基极大地方便和简化了试验流程。
自诱导培养基(lac启动子)(Auto-induction Medium)产品及特点
本产品是在pET专用生长培养基的基础上开发而成的,它利用E.coli自身对培养 基中碳源和能源的调控利用机制,实现外源蛋白在细菌达到饱和期后的自动诱发。
具有下列特点:
1. 不需添加任何IPTG或相关诱导物,节约成本。
2. 免去了密切监控菌液密度的过程,尤其适合大规模筛选 。
3. 细菌生长密度远高于IPTG诱导表达系统 。
4. 外源蛋白表达量远远高于IPTG诱导表达系统。
5. 本产品即开即用,操作简单 。
6. 与各种细胞培养容器兼容(如培养瓶、培养罐、深孔管、发酵罐等)。
过夜培养自动诱导细胞表达的培养基系统,培养基都可以大程度上提高pET系列和其它IPTG原核诱导表达系统在大肠杆菌中蛋白的表达量,其的方便之处在于使用这种培养基不需要对大肠杆菌的生长密度进行检测。因为IPTG会对细胞存在毒性,因此使用了这种不含IPTG的自动诱导体系培养基与传统培养基相比可以使细胞数量和目的蛋白量都大大增加数倍。
这种培养基是基于F. William Studier博士的技术,使用了不同代谢成分提高细胞的生长密度,并自动诱导lac启动子开始转录。Overnight Express Instant TB Medium培养基现在提供三种不同的成分。作为一种粉末装TB培养基它可快速溶解在水中,并进行微波加热和高压灭菌处理。
产品介绍
规格: 500g
外观: Beige powder. Autoclaved medium should be amber.
存储: 2ºC – 25ºC. When not in use, keep container closed to avoid hydration.
配置:
Add 34,85g of the dehydrated medium to one liter of distilled water. Mix well and dissolve by heating with regular agitation. Boil for 1 minute in order to dissolve completely. Dispense in appropriate containers and sterilize by autoclaving at 121ºC for 15 to 20 minutes. Store at 2ºC to 8ºC.
成分 (g/L):
Tryptone: 10,00
Yeast Extract: 5,00
MgSO4: 0,15
(NH4) 2SO4: 3,30
KH2PO4: 6,80
Na2HPO4: 7,10
Glucose 0,50
Alpha Lactose 2,00
Final pH (25ºC): 7,0 ± 0,2