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实了个验5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液

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供货周期:现货 应用领域:医疗卫生,环保,生物产业,制药,综合
杭州实了个验生物科技有限公司

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  产品与服务

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  市场与客户

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  未来展望

  展望未来,实了个验公司将继续坚持创新驱动、质量为本的发展战略,不断提升技术水平和服务质量,努力成为实验室设备和科研仪器领域的企业。我们将紧跟科技发展趋势,不断推出符合市场需求的新产品,为客户提供更优质的产品和服务,为科技进步和社会发展作出更大的贡献。

 

详细信息

5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(含DTT)(1 mL)是一种专门为蛋白质电泳分析设计的试剂,用于在SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)中准备蛋白质样品。该缓冲液通过提供适宜的化学环境,确保蛋白质样品在电泳过程中保持变性状态,并有效分离。缓冲液中的DTT(Dithiothreitol,二硫苏糖醇)成分有助于还原蛋白质中的二硫键,确保蛋白质解折叠,为电泳提供了最佳条件。

1. 实了个验5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液:产品概述

5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液是一种高浓度缓冲液,在使用前需要稀释到1×工作浓度。它通常包含以下关键成分:

  • SDS(十二烷基硫酸钠):一种阴离子去污剂,用于使蛋白质带负电荷,并在电泳过程中保持其线性展开的状态。

  • 甘油:增加样品密度,确保样品在加载时沉到凝胶槽底部。

  • 溴酚蓝:一种蓝色染料,作为电泳的指示剂,帮助研究人员监控样品在电泳过程中的迁移。

  • Tris-HCl缓冲液:维持电泳样品的pH稳定,确保电泳过程的顺利进行。

  • DTT(二硫苏糖醇):一种强还原剂,能够还原蛋白质中的二硫键,确保蛋白质解折叠。

2. 实了个验5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液:主要成分与功能

2.1 SDS

SDS是一种强效的阴离子去污剂,它与蛋白质结合后,使蛋白质带上均匀的负电荷,确保蛋白质在电泳过程中只根据其分子量而迁移。SDS的作用还包括帮助蛋白质保持变性状态,避免在电泳过程中重新折叠。

2.2 甘油

甘油的主要作用是增加样品的密度,使样品能够顺利沉入电泳凝胶的加样槽底部,而不会扩散或漂浮,从而保证加样过程的准确性。

2.3 溴酚蓝

溴酚蓝是一个可视化的指示剂,在电泳过程中随电流迁移,研究人员可以通过观察溴酚蓝的迁移情况来判断电泳的进度,并决定何时停止电泳。

2.4 Tris-HCl缓冲液

Tris-HCl是常用的生物化学缓冲液,能够稳定电泳过程中的pH值,防止由于pH变化导致的蛋白质电泳行为异常。

2.5 DTT(Dithiothreitol)

DTT是一种强还原剂,能够还原蛋白质中的二硫键,破坏二硫键形成的蛋白质三维结构,从而使蛋白质链展开。这一过程对于确保蛋白质在电泳中的正确分离至关重要。

3. 应用领域

3.1 蛋白质样品制备

5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液被广泛用于蛋白质样品的制备。研究人员可以将蛋白质样品与缓冲液按比例混合,然后通过加热使蛋白质充分变性和解折叠,确保样品在电泳过程中以单一、线性状态迁移。

3.2 SDS-PAGE电泳分析

在SDS-PAGE分析中,5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液是的试剂。它确保蛋白质样品在上样后的稳定性和一致性,确保样品在电泳中的良好分离效果,特别是在研究蛋白质的分子量、表达水平和纯度时起到关键作用。

3.3 Western Blot实验

在Western Blot实验中,5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液被用来准备蛋白质样品,以确保在电泳和转膜步骤中蛋白质能够被有效分离和检测。DTT的还原作用有助于确保蛋白质的线性展开状态,这对抗体识别和结合至关重要。

4. 使用方法

使用5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液的典型步骤如下:

  1. 样品准备:根据实验需求,将5×缓冲液与蛋白质样品按4:1的比例混合(例如,10 µL样品中加入2.5 µL的5×缓冲液),混合均匀。

  2. 加热变性:将混合好的样品在95°C的热块中加热5-10分钟,以确保蛋白质变性和解折叠。加热后可以迅速冷却样品。

  3. 样品加载:将变性后的蛋白质样品加载到已准备好的SDS-PAGE凝胶的加样槽中。注意不要让样品溢出或混入相邻的样品槽。

  4. 电泳运行:按照标准的SDS-PAGE程序运行电泳。溴酚蓝将随着电流迁移,可以通过观察其位置来判断电泳的进展。

  5. 后续分析:电泳结束后,凝胶可以通过染色或者转膜进行蛋白质分析,如Western blotting。

5. 产品优势

5.1 高效变性

5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液中的SDS和DTT共同作用,确保蛋白质样品在电泳前变性,避免蛋白质聚集或异常迁移,提高电泳的分辨率和重复性。

5.2 稳定性与一致性

缓冲液成分经过优化,能够在长时间储存和不同实验条件下保持稳定,为电泳实验提供一致的结果。这对于需要高重复性的实验尤为重要。

5.3 便捷使用

5×的浓缩形式使得该缓冲液使用非常灵活。研究人员只需少量即可满足实验需求,减少了试剂的浪费,并且便于在不同的实验设置中调整使用量。

6. 注意事项

  • 储存条件:缓冲液应存放在4°C下,避免长期暴露在光线或高温环境中,以确保DTT的还原能力和SDS的活性。

  • 使用时机:DTT在溶液中较易氧化,建议在使用前新鲜配制工作溶液,以确保其还原。

  • 防止交叉污染:在操作过程中,确保移液器和样品管清洁,避免不同样品间的交叉污染。

7. 实验应用实例

在研究细胞信号通路中的蛋白质表达时,5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液被用来制备细胞提取物。研究人员通过SDS-PAGE分离细胞裂解物中的蛋白质,随后进行Western blot分析,以确定关键信号蛋白的表达水平和磷酸化状态。这些数据对理解信号通路的激活机制具有重要意义。

在工业生物技术中,5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液用于分析重组蛋白的表达和纯化效果。通过对表达产物进行电泳分析,可以评估生产过程中蛋白质的纯度和一致性,从而优化生产工艺。

8. 总结

5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(含DTT)(1 mL)是一种关键的实验试剂,在蛋白质电泳分析中起着至关重要的作用。其高效的变性效果、稳定的性能以及便捷的使用方式,使其成为科研实验室中的工具。无论是在基础科研还是应用开发中,该缓冲液都为蛋白质分析实验提供了强有力的支持,确保实验结果的准确性和可靠性。


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