ADF培养基主要由磷酸盐、柠檬酸、葡萄糖、葡萄糖酸、等组成,并含有众多微量元素,如锰、锌、铜、铁、等金属离子等,经无菌处理。该试剂含 ACC(1-氨基羰酰-1-环丙烷羧酸)。DF培养基常与ADF培养基联合使用,用于分析细菌的 ACC脱氨酶特性,菌株置于ADF培养基中的生长要好于 DF培养基,说明该菌株能够以ACC氮源进行生长,即该菌株能够产生ACC脱氨酶。
自备材料:
1、DF培养基、NDF培养基(选做)
2、摇床
3、比色杯
4、分光光度计
5、无菌离心管或培养器皿
6、接种环
操作步骤 (仅供参考) :
1、取无菌离心管或培养器皿,加入3ml ADF培养基、DF 培养基(选做)、NDF培养基(选做)。
2、将纯化的菌株同时接种于上述ADF培养基、DF培养基(选做)、NDF培养基(选做)中,置于摇床 150r/min 振摇培养 72h。
3、观察同一菌株在 ADF 培养基、DF培养基(选做)、NDF培养基(选做)三种不同培养基中的生长情况。
4、用分光光度计在600nm处测定各培养菌液的OD值,以便判断菌株长势。
结果:
当菌株置于ADF培养基中的生长明显好于DF培养基时,说明该菌株能够以ACC为氮源进行生长,即该菌株能够产生ACC脱氨酶。
注意事项:
1、 置于 DF 培养基、NDF 培养基中培养是可选步骤,不是必须步骤。
2、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。注意无菌操作,避免微生物污染。
3、 如果没有分光光度计,也可以使用普通的酶标仪测定。