脐带血单个核细胞（CB-MNC）是通过密度梯度离心法从新生儿脐带血中分离得到。主要包含淋巴细胞、单核 细胞、骨髓细胞以及一些干 / 祖细胞。因其具有免疫原性低、增殖分化能力强、无致瘤性等优势，可用于组织修复、 免疫系统疾病、心血管疾病、消化系统疾病以及间充质干细胞联合应用等方面的研究中

细胞复苏说明书

一、试剂耗材

² 复苏培养基（10%灭活FBS的DMEM/RPMI-1640培养基）；

² 实验用培养基

² 移液枪；

² 15ml离心管；

² 水浴锅；

² 75%酒精；

² 离心机；

² 计数仪

二、细胞解冻

1、将培养基在37℃水浴锅中预热；

2、取15mL离心管加入5-10mL预热的培养基置于生物安全柜中备用；

3、从干冰/液氮中取出细胞，将冻存管尽可能多的浸入液面以下（至少冻存液部分全部在液面以下），确保管盖在液面上方，在37℃水浴锅中轻柔水平画圈晃动冻存管使其快速融化，直到管内只剩小片冰晶，融化过程中可随时观察融化情况，大约耗时120s；

4、用75%酒精消毒冻存管外部后，将冻存管拿进生物安全柜中使用无菌纸或无菌布擦干管壁，然后开盖，将管内细胞悬液轻轻吹打混匀；

5、将细胞悬液滴加至已准备好培养基的15mL离心管中，吸1mL培养基润洗一下冻存管，然后盖上盖子颠倒混匀；

6、室温下，以300g的转速离心10分钟，转移上清至另一个干净的离心管中，以防离心后细胞数量发生较大偏差；

7、加入2mL实验所需培养基将细胞重悬，然后定容至5mL,混匀准备计数；

8、取10uL细胞悬液，按1:1混合AO/PI后使用计数仪计数或使用台盼蓝染色然后使用血球计数板计数，记录细胞活率和细胞密度；

9、下面提供血球计数板的计数办法：

N =血球计数板的4角大方框所数的所有细胞个数

d =稀释倍数

细胞数量/管=N÷4×2×d ×    mL=     × 10⁴

细胞活率=未被台盼蓝染色的细胞个数÷细胞总数×1OO%=    %

10、计数之后根据实验需求，添加实验用培养基调整您需要的细胞密度进行接下来的实验。

三、备注

1、若您需要再次洗涤细胞，重复步骤6-8，每次洗涤会造成10-15%的细胞损失；

2、若离心后细胞数量低于预期，将步骤6的上清液再次离心，可使用400g/10min离心条件离心后重悬计数；