- ¥1951件起订
起订量：
RC52314-50ML*2 AMEKO试剂：超敏ECL化学发光底物
- 型号
- RC52314-50ML*2
该企业相似产品
上海联硕生物科技有限公司，是一家专注于生命科学和生物技术领域的高科技企业，专业提供分子生物学、免疫学、生命科学基础研究以及临床检测等诸多领域的试剂、耗材、仪器等各类产品及生物技术服务。公司一方面注意跟踪世界范围分子生物学、细胞生物学等生物学科的发展前沿，努力将欧美专业生产厂家的具有高水平的产品推荐给各类研究人员；另一方面也非常重视自主产品研究和开发，推出了一系列具有竞争力的产品和服务。公司客户遍布大学、研究所、医院、卫生防疫、商品检验检疫、制药公司、生物技术公司和食品工业等单位。公司在重视产品质量的同时，也建立了一套集技术支持、物流、售后服务等多个部门的*的服务体系，努力把我们方便、快捷、周到的服务提供给每一个客户。 公司主营业务： 试剂盒：免疫组化试剂盒、ELISA试剂盒、分子生物学试剂盒。 细胞：*细胞、国产肿瘤细胞、国产正常细胞。 耗材：细胞培养耗材、普通实验耗材。 生化试剂：*生化试剂、进口分装生化试剂、国产生化试剂。 抗体：免疫组化、免疫荧光、流式细胞检测、免疫细胞化学。 公司代理品牌：RB .RND. Amresco 、prospec 、lifespan 、ABR、s 、spring、 abcam 、Santa Cruz、usbio BD耗材、Gibco试剂、 corning耗材 sigma试剂
详细信息
ECL化学发光底物（超敏）
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
RC52314 | ECL化学发光底物（超敏） | 100 ml |
RC52314 | ECL化学发光底物（超敏） | 500ml |
产品简介：
ECL超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原。
产品组份：
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
RC52314 | 增强型发光液 A液 | 50ml/250ml |
RC52314 | 稳定剂 B 液 | 50ml/250ml |
用途：用于HRP标记抗体的Western Blot和HRP标记探针的核酸杂交。
产品特点：
1、灵敏度高：可检测低皮克级的蛋白；
2、信号持续时间长：光信号持续时间长达5小时；
3、稳定试剂：工作液在24小时内保持稳定；
4、成像方法：适用于CCD或激光凝胶成像仪；
5、价格经济：针对稀释的抗体浓度条件进行了优化，节省抗体：
一抗：以1 µg/mL储存液稀释1:1,000至1:4,000倍
二抗：以1 µg/mL储存液稀释1:2,000至1:5,000倍
6、简单易用：可替代其它公司的ECL发光底物，操作步骤无需进行特别优化；
使用方法:
1、执行常规SDS-PAGE、转膜和Western Blot步骤。注意用HRP标记IgG或用一抗-链亲和素-生物/素-HRP夹法。
2、 Western Blot最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液：分别取等体积的溶液A和B，放入干净容器中混合。建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
3、 用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜干燥。将膜浸入发光工作液（0.125mL发光工作液/cm2膜）中，与发光工作液充分接触。室温孵育3分钟，准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。
4、 用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。
5、 打开X光胶片暗盒，在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来包裹Western Blot膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。
6、 暗房内压X光胶片，分别曝光不同的时间，如数秒到数分钟。显影冲洗。建议第一次曝光 60 秒，之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底物孵育后的前 5-30 min期间是强烈的。这一反应可以持续几个小时，但强度会随时间下降，如有底物孵育后较长时间后曝光，曝光时间可能需要延长以获得较强信号。
注意事项：
（1）步骤1～5可在日光灯下操作；但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。
（2）长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
（3）发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光，因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。
（4）由于超敏发光液极其灵敏，建议按照推荐比例稀释抗体。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。
（5）某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。
（6）使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
（7）叠氮钠是 HRP 的抑制物，不要使用叠氮钠作为缓冲液的防腐剂。
问题解答：
问题 | 可能问题 | 解决方案 |
胶片上有反转像（即黑色背景，白色带） |
系统中HRP过多 |
将HRP标记二抗稀释至少10倍 |
膜上有褐色或黄色带 | ||
印记在暗室中发光 | ||
信号持续时间少于8小时 | ||
信号弱或无信号 | 系统中过多的HRP耗尽了底物并导致信号迅速衰减 | 将HRP标记二抗稀释至少10倍 |
抗原或抗体的量不足 | 增加抗体或抗原的量 | |
蛋白质转移率低 | 优化转印 | |
HRP 或底物活性低 | 见下文注释 | |
高背景 | 系统中 HRP 过多 | 将HRP标记二抗稀释至少 10 倍 |
封闭不充分 | 优化封闭条件 | |
封闭式机不合适 | 尝试一种不同的封闭试剂 | |
洗涤不充分 | 增加洗涤时间、次数或洗涤缓冲液体积 | |
胶片过度曝光 | 缩短曝光时间或使用背景消除剂 | |
抗原或抗体的浓度太高 | 减少抗体或抗原的量 | |
蛋白质条内有斑点 | 蛋白质转膜效率低 | 优化转印流程 |
膜的水化不均匀 | 按照制造商建议适度的使膜水化 | |
胶片与膜之间存在气泡 | 在胶片曝光前，去除气泡 | |
胶片上背景有斑点 | HRP 标记二抗中存在聚集物 | 使用 0.2um 的过滤器 |
非特异性条带 | 系统中 HRP 过多 | 将HRP标记二抗稀释至少10倍。 |
SDS 导致的蛋白非特异性结合 | 在检测过程中不使用 SDS |
*为检测系统活性，在暗室中，在一个清洁试管中制备1-2ml工作液。关闭灯，添加1ul未稀释的HRP标记二抗工作液。该溶液应当立即发出蓝色光，蓝光信号在随后的几分钟渐淡。
AMEKO试剂：超敏ECL化学发光底物
AMEKO试剂：超敏ECL化学发光底物
