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上海裕平生物主要经营ELISA试剂盒 鸭白介素1(IL-1)ELISA试剂盒应用的一些说明 克服非特异性吸附 公司展台: http://www.yupingbio.com
在ELISA中,非特异性吸附是值得注意的问题,如果抗原或抗体纯化不过关,产生非特异性吸附是实验操作中无法避免的。
但是,即使抗原抗体的纯化达到一定水平,还是有可能产生非特异性吸附。例如塑料载体表面的吸附,为了避免非特异性显色,需用含Tween20的PBS或生理盐水作为洗脱液,吐温 (Tween)就是指聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯,为非离子型的表面张力物质,常作为助溶剂。根据它与聚合山梨醇所结合的脂肪酸种类不同而进行吐温编号,结合月桂酸的为吐温20,结合棕榈酸的为温40,结合硬脂酸的为吐温60,结合油酸的为吐温80。在免疫酶技术中常用含吐温20的PBS作洗涤剂或作稀释样品和酶标抗体(抗原)之用,它的洗涤效果要比牛血清蛋白溶液(0.5%)好,具有减少非特异性吸附和增强抗原抗体结合的作用。吐温20的使用量一般在0.06%-0.1%.有学者认为,Tween20还有增强特异性反应的作用。另外,检测血清和酶标记抗体用含0.5%-1%牛血清白蛋白(或0.1%白明胶)稀释也能得到增强特异性吸附的作用。样品首先用稀释的健血清孵育,也有助于去除非特异性显色。除此之外,反应的时间和掌握反应剂zui适浓度,也有助于克服非特异性吸附。
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