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1.2 RNAi载体构建服务

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详细信息

1.2 RNAi载体构建服务
诺百优势
质量保证:针对一个基因的不同位置设计4条miRNA序列,在转染效率>80%的前提下,我们保证至少2个克隆在mRNA水平
达到70%以上的Knockdown效率
多种平台载体可供选择:shRNA载体,miRNA干扰载体(第二代干扰载体),miR-shRNA载体(第三代干扰载体)
利用绿色荧光蛋白(GFP)和感兴趣的RNAi序列协同表达,方便追踪
可将多个RNAi序列串联到同一表达载体中并同时表达,进行多个靶基因的同时干扰
原理
RNA干扰(RNAi)是有效抑制基因表达以及研究各种细胞类型中蛋白质功能的*方法。相比传统的短/小干扰RNA(siRNA),
使用载体进行RNAi实验*地扩展了实验的可能性。
采用载体技术能够:
实现瞬时或稳定的靶标抑制
在任何类型的细胞(甚至是难转染的细胞、原代细胞和非分裂细胞)中执行 RNAi
通过诱导型RNAi表达来调控基因抑制
选择稳定表达RNAi序列的纯细胞群
通过组织特异性启动子控制体内基因表达

我们的RNAi载体构建,有以下选择:


1) shRNA干扰载体构建:短发卡RNA(shRNA)是可以克隆到表达载体并表达短的干扰RNA(siRNA,19 - 21个核苷酸的
RNA双链)的DNA分子。我们可根据靶标设计短发卡RNA (shRNA)序列并将其克隆入shRNA载体上。
2) miRNA(microRNA)干扰载体构建:属于第二代RNA干扰载体平台,拥有更高干扰效率和RNA干扰片段设计成功率。
miR RNAi表达载体采用Pol II启动子表达人工设计的miRNA,后者从长的转录本被加工,进而导致特异性的mRNA的降解。
3) shRNAmir是用19nt的siRNA序列替代miRNA中的作用序列,保持miRNA的环和双臂结构。基于miRNA mir-30或miRNA
mir-155双臂结构的shRNAmir质粒载体RNAi效果更好:shRNAmir是目前效果的RNAi产品形式。
服务流程
1) 客户提供:基因的Accession Number
2) 针对特定基因,设计RNAi序列;合成该序列并退火生成双链DNA
3) 将DNA与RNAi载体相连,连接物转化大肠杆菌
4) 测定全长序列以鉴定序列的正确性;制备甘油菌
5) 提供数据分析和报告给客户
6) 我们提供:构建好的RNAi表达载体和相应的甘油菌

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