SILAC代谢标记定量实验服务

实验技术简介: SIL AC的基本原理是分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素(重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸，细胞经5-6个倍增周期后，稳定同位素标记的氨基酸*掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合，经分离、纯化后进行质谱鉴定，根据一级质谱图中两个同位 素型肽段的面积比较进行相对定量。属于体内代谢标记法。

实验操作流程:

1、蛋白提取和样品制备

2、标记效率测试

3、样品混台

4、SDS-PAGE分级

5、酶解

6、质谱鉴定

7、软件分析

8、定性定量蛋白质组结果

9、生物信息学数据挖掘和统计分析

实验注意事项:

客户提供:

1、蛋白质提取物:浓度>1μg/ul, 蛋白质总量>300μg.

2、细胞:通过细胞计数取不少于2x106个细胞于EP管，加入0 5ml生理盐水或蛋白保护剂，混匀后保存于冰箱(-80°C， 避免反复冻融)。

交付标准:

1、蛋白质鉴定和SIL AC定量分析结果;

2、客户蛋白质对应的质谱峰图;

3、SIL AC实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。

其他:

1、SILAC是体内标记技术，稳定同位素标记的氨基酸与天然氨基酸化学性质基本相同，所标记的细胞和未标记细胞在生物学行为上几乎没有差异，标记效率可高达100%。

2、采用质谱定量,定量结果准确且批次变异小、重复性好。

3、体内代谢标记与SDS- PAGE或色谱分离技术相结合，兼容疏水性蛋白和偏碱性蛋白，不受蛋白性质限制。

4、多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定,后续实验对样品的影响一致， 减少了实验操作和仪器设备产生的影响。

5、由于该技术属于体内标记，标记效果稳定，其标记效率不受裂解液的影响，不仅适合于进行全细胞蛋白的分析，还适合于膜蛋白的鉴定和定量。

6、与化学标记相比，SIL AC方法蛋白需要量明显减少，通常每个样品只需要几十微克的蛋白量。

7、活体标记，更接近样品真实状态。

8、只适用于活体培养的细胞，对于生物医学研究中常用的组织样品，体液样品等无法分析,对于动物模型的标记成本太大，无法实现。与体外标记技术相比，SIL AC属于体内标记，具有以下技术优势

1、高通量，可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质;

2、定量精确，降低由于样品制备不同而造成的实验差异;

3、线性定量范围广;

4、灵敏度更高，蛋白质需要量明显减少;

5、标记采用的是体内标记技术，更接近样品真实状态。

SILAC技术服务内容

1、细胞同位素标记;

3、SDS-PAGE分离;

4、胰酶酶切后液相分离和质谱分析;

5、数据库检索及蛋白质定量分析;

6、差异蛋白的生物信息学分析;

7、实验报告提交。

实验服务报告内容

1、蛋白定鉴定和SIL AC定量分析结果;

2、顾客蛋白质对应的质谱峰图;

3、SIL AC实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。

技术服务优势

1、灵敏度高，检测限低，可检测出低丰度蛋白;

2、分离能力强，分析范围广，iITRAQ可以对任何类型的蛋白质进行分离鉴定，包括高分子量蛋白质、酸

性蛋白和碱性蛋白，膜蛋白和不溶性蛋白;

3、高通量:同时对8个样本进行分析，提高了实验通量，可同时对多个时间点或不同处理的蛋白质进行分析;

4、结果可靠:定性与定量分析结果更加可靠;

5、自动化程度高:液相与质谱连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。

实验代做服务：