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石蜡冰冻切片TUNEL凋亡荧光
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生产厂家公司承接各种实验代做外包服务:石蜡包埋、免疫组化、HE染色、PAS染色、DNA提取、RNA提取、探针、SNP检测、WB、EMSA、CCK8检测、细胞凋亡、细胞周期检测、流式、质粒转染、ROS活性氧检测、线粒体膜电位检测、平板克隆、软琼脂克隆、细胞划痕、细胞粘附,并为广大科研用户提供各种高品质的高*_端化学试剂、生物学试剂、免疫学检测,ELISA试剂盒(免费代测)、生化试剂盒、分析标准品、对照品、标准物质、食品安全检测试剂、动物疫病类检测产品、兽药残留检测试剂、细胞培养服务等,应用覆盖药物分析领域、食品安全领域、聚合物研究领域、环境监测领域,客户广泛分布于食品、制药、第三方检测、环境测试机构、化工、科研院校、生物工程等行业。
主营:
1生化试剂、标准品对照品、标准物质、
2.ELISA试剂盒、分离液、分离液试剂盒
3.细胞:*细胞、国产肿瘤细胞、国产正常细胞、肿瘤耐药细胞
4.食品安全检测试剂、动物疫病类检测产品、兽药残留检测试剂
5.耗材:常用实验耗材、移液器
一、石蜡冰冻切片TUNEL凋亡荧光实验原理:
dUTP缺口末端标记(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling,TUNEL) 法检测细胞凋亡的原理是当细胞发生凋亡时,DNA内切酶被激活,核小体间的基因组DNA被切断,暴露的3-0H可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TerminalDeoxynucleotidyl Transferase, TdT)加上带有荧光素FITC标记的dUTP,从而可以通过荧光显微镜进行检测。
二、石蜡冰冻切片TUNEL凋亡荧光实验意义:
1.TUNEL法是一种分子生物学与形态学相结合的研究方法,可对完整的单个凋亡细胞或者凋亡小体进行原位染色,可以准确反映细胞凋亡典型的生物化学和形态特征。
2.可用于石蜡切片、冰冻切片、培养的细胞等进行细胞凋亡检测,灵敏度远比一般的组织化学和生物化学方法要高。
3.操作简便快捷,在细胞凋亡的研究中被广泛采用。
三、TUNEL凋亡荧光实验步骤:
1.石蜡切片TUNEL显色法:
①石蜡切片常规脱蜡至水,脱蜡剂= =甲苯,至水剂乙醇;
②PBS漂洗3*5 min; .
③加入蛋白酶K工作液379C反应15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
④4%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室温固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
⑤浸入封闭液(3%H202)室温封闭10 min, PBS漂洗3x5 min;
⑥参考使用试剂盒的说明书配制适量的TUNEL检测液,其中含有TdT酶、荧光标记液、TUNEL检测液;
⑦样品上加入适量TUNEL检测液,37°C避光孵育60 min, PBS漂洗3x5 min;
⑧选择是否用DAPI复染细胞核;
⑨使用抗荧光淬灭封片液封片后在荧光显微镜下进行观察。
2.冰冻切片TUNEL显色法:
①新鲜组织经处理后,立即在恒冷冰冻切片机内切片,厚度为5~6 um;
②防脱玻片,贴片,室温阴干约12h;③4%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室温固定10 min,
PBS漂洗3x5 min;
④浸入封闭液(3%H20O2) 室温封闭10 min, PBS漂洗3x5 min;
⑤浸入通透液(0.1%Triton X-100溶于PBS中),室温通透30 S-2 min;
⑥参考使用试剂盒的说明书配制适量的TUNEL检测液,其中含有TdT酶、荧光标记液、TUNEL检测液;
⑦样品上加入适量TUNEL检测液,37°C避光孵育60 min, PBS漂洗3x5 min;
⑧选择是否用DAPI复染细胞核:
⑨使用抗荧光淬灭封片液封片后在荧光显微镜下进行观察。
四、结果展示
实验完成周期及交付标准
1.实验周期: 1-2周
2.交付标准:蜡块、切片、染色图片.实验报告(实验步骤、试剂、耗材等)
需确认的信息
1.样本的种属
2.样本的类型(固定的组织or蜡块or切片)
3.是否提供试剂盒
4.拍照要求
实验代做服务:
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