种子检测

材料与仪器

UV-1800紫外可见分光光度计、冷冻高速离心机，旋涡混合器，恒温水浴锅等

材料：黄化水稻幼苗

试剂：0. 1 mol / L硼酸缓冲液（pH 8. 8）；0. 02 mol/ L 1 L-苯丙氨酸：称取3.33 g/ L-苯丙氨酸溶于1000 mL 0. 1 mol/L"1 硼酸缓冲液（pH 8. 8）；7 mmol - 統基乙醇硼酸 缓冲液：0. 11 mL 藐基乙醇用 0. 1 mol/L-1 硼酸缓冲液溶解，并定容至 200 mL；聚乙烯毗咯 烷酮（PVP）。

实验步骤

酶液制备：称取黄化水稻幼苗 0.5 g, 先加 1.5 mL 预冷的提取液（即 7 mmol - L-1 蔬 基乙醇硼酸缓冲液）、过量的聚乙烯毗咯烷酮（PVPX 但不能太多，否则不易研磨）、少量石英 砂在冰浴下研磨成浆，再加 3.5 mL 预冷的提取液使其终体积为 5 mL。于 12 000 g 4°C 下离心15 min, 用吸管吸取上清液，即粗酶液。

酶活测定：

反应液包括：①0.02 mol - L_1 L-苯丙氨酸 1 mL；

②0.1 mol - L 1 硼酸缓冲液（pH 8. 8）2 mL；

③0.1 mL 粗酶液。

（对照以 0. 1 mL 疏基乙醇缓冲液代替酶液）

反应液用涡旋混合器混匀后立即在 290 nm 处测起始吸光度值，并精确计时。（每一样品 重复两组）将测定后的各管于 30 °C 水浴保温 30 min, 再于 290 nm 处测定各管的吸光度值。 本实验用UV-1800紫外可见分光光度计以每 30 min 在波长 290 nm 处吸光度值增加 0. 01 所需酶量为 1 个单位（U）。