葡萄酒及果酒检测

红酒中防腐剂和甜味剂检测

参考国标（GB/T 23495-2009），利用全新高性能的LC500HPLC高效液相色谱仪，经实践检测可提供苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的HPLC检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，适用于红酒中苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的测定，仅供广大用户参考。

　　以下是苯甲酸、山梨酸和安赛蜜、糖精钠的详细检测方法。

1　仪器与试剂

1.1 仪器

LC-500HPLC高效液相色谱仪，SPD-500紫外检测器，手动进样阀(7725i)，WK-500色谱工作站

色谱柱　250mm×4.6mm×5μm；

超声波水浴振荡器；

红酒粉碎机；

pH计；

天平：分度值为0.001 mg。

1.2 试剂

甲醇：色谱纯。

乙酸铵溶液：称取1.54 g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000 mL，经0.45μm微孔滤膜过滤。

亚铁氰化钾溶液：称取106 g亚铁氰化钾[K3Fe(CN)6•3H2O]加水至1000 mL。

乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌[Zn(CH3COO)2•2H20]溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，加水稀释至l000mL。

氨水(1+1)：氨水与水等体积混合。

2 色谱条件

色谱柱：Vertex C18柱，250mm x 4.6 mm，5μm；

流动相：甲醇+0.02mol/l乙酸铵溶液(5:95)；

　　流速：1 mL／min；

　　进样量：20μL；

　　检测波长230nm。

注：1-安赛蜜；2-苯甲酸；3-山梨酸；4-糖精钠；混合标准溶液色谱图  

3　试样溶液的制备

3.1 含脂肪、蛋白的样品

称取约10g左右样品于烧杯中（固体样品要用搅拌机搅碎），加入约60ml蒸馏水，再超声波水浴振荡10分钟，然后用转移到100ml比色管中，并用少量水润洗干净烧杯；　　加入5ml亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5 mL乙酸锌溶液，摇匀；根据PH计读数，用氨水调节PH至接近中性；用水定容至100ml刻度，摇匀，用三角瓶,滤纸，玻璃棒，漏斗过滤；吸取滤液约1.5ml，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

3.2 不含脂肪、蛋白的样品

称取约10g左右样品于烧杯中（固体样品要用搅拌机搅碎），加入约60ml蒸馏水，再超声波水浴振荡10分钟，然后转移到100ml比色管中，并用少量水润洗干净烧杯；根据PH计读数，用氨水调节PH至接近中性；用水定容至100ml刻度，摇匀，用三角瓶,滤纸，玻璃棒，漏斗过滤；吸取滤液约1.5ml，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

 4　结果分析

4.1 仪器精密度的测定

取浓度为苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜浓度为10.0ug/ml，平行测定7次。

表1：精密度的测定结果

分析结果可以得出，每个组分峰面积的相对标准偏差均小于1％，表明仪器在选定条件下重现性好，可以满足分析测定的要求。

4.2 回收率的测定

分析结果的准确度可以用回收率来衡量。回收率越接近100％，测得的结果越接近真值，即准确度越好。同时平行测定结果的相对标准偏差可以表明方法的重现性。

　　取清凉茶、样品分别进行加标实验，加入苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜浓度均为10.00ug/ml标准溶液，平行测样7次，进行回收率实验。测定结果见表2。

 表2：清凉茶的加标测定结果和回收率

 　　从上表可以看出清凉茶的加标测定的回收率：苯甲酸为98.5%-103.4%，山梨酸为98.3%-103.1%，糖精钠为97.5%-104.3%,安赛蜜为98.4%-103.3%。各组分的回收率都接近100%，满足日常检测的要求。

7. 液相色谱仪器配置