水产品检测

淡水鱼中地西泮和奥沙西泮残留量的检测

地西泮、奥沙西泮是一类中枢系统镇静剂，主要用于人和动物镇静、催眠的治疗，同时还可以用作动物的增重促进剂。因此促使了非法使用该类药物，用于淡水鱼的饲养和运输，导致在淡水鱼体内会有部分残留，当人们摄入这些药物后，肝脏负担增重、头脑昏沉、运动和肌肉功能受到抑制。

迪马科技参考相关方法，建立了SPE-UPLC-MS/MS法，可测定淡水鱼中的地西泮、奥沙西泮，本方案使用乙腈提取，用氯化钠和硫酸钠除水，ProElut^® C18-U固相萃取柱净化，Endeavorsil^® C18色谱柱分离检测，内标法定量，定量限回收率在90%-110%之间。

本方案使用了C18-U小柱净化，增强了目标物在小柱上的保留，提高了化合物绝对回收率，保证了实验结果稳定性。

本方案适用淡水鱼中地西泮和奥沙西泮残留量的检测，定量限1μg/kg。

(1) 地西泮和奥沙西泮储备液：分别定量称取地西泮和奥沙西泮标准品，分别用50%乙腈水稀释并定容，得到浓度为1mg/mL的单标储备液。

(2) 混标中间液：准确吸取适量地西泮和奥沙西泮储备液，用50%乙腈水稀释并定容，配置成浓度为1.0μg/mL的混标中间液。

(3) 混标工作液：准确吸取适量混标中间液，用50%乙腈水稀释并定容，配置成浓度为0.1μg/mL的混标工作液。

(4) D₅-地西泮、D₅-奥沙西泮混合内标工作液：分别定量吸取D₅-地西泮和D₅-奥沙西泮标准品，用50%乙腈水稀释并定容，配置成浓度为0.2μg/mL的混合内标工作液。

称取2g样品于50mL离心管中，加入50μL混合内标工作液，加入10mL乙腈，涡旋10min,加入1g氯化钠和4g硫酸钠（Cat.#:64616s），6000r/min离心5min，转移上清至15mL离心管中，残渣用5mL乙腈重复提取一次，合并上清液。40℃水浴中氮吹至干，用3mL 40%甲醇水溶液复溶，待净化。

ProElut^® C18-U 500mg/3mL (Cat.#:63504)

(1)活化：用3mL甲醇和3mL水活化

(2)上样：备用液全部过柱，弃去流出液；

(3)淋洗：用3mL 40%甲醇水淋洗，真空抽干1min，弃去流出液；

(4)洗脱：加入3mL甲醇洗脱，收集洗脱液；

(5)重新溶解：将洗脱液在40℃水浴下氮吹至干，用40%甲醇水定容至1.0mL，混匀，过Nylon膜（Cat.#:37177），上机分析。

(1) UPLC条件

色谱柱：Endeavorsil^® C18 50x2.1mm, 1.8μm (Cat.#:87002)

流速：0.3mL/min

进样量：5μL

柱温：40℃

流动相：A: 0.1%甲酸水  B:甲醇

(2) 质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：5500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃