生物药品原料检测

胰腺病毒的冻干工艺研究

随着基因治疗研究的逐渐深入，作为其基础的病毒载体研究也有了突飞猛进的发展。采用病毒载体的基因转移技术治疗人类疾病也从实验室研究逐步进入到临床试验阶段。腺病毒因其对人致病性小且不诱导癌变，宿主细胞广，繁殖度高，装载容量大，越来越多的应用于病毒载体的研究。但是腺病毒制品对温度较为敏感，给运输、保存带来较大困难，这在很大程度上限制了其在临床上的应用。

冷冻干燥技术广泛应用于食品、医药、疫苗等，采用此技术可较好地保持产品原有的理化性质和生物活性，且有效成分损失极少，产品因含水量低而易于长期保存。近年来，国外陆续出现将冷冻干燥技术应用到病毒疫苗及腺病毒制剂研究中的报道。目前腺病毒的保存条件为 PBS缓冲液于 -20 ℃以下保存，经研究发现，在这种条件下的腺病毒在25 ℃保存8 h及4 ℃保存24 h活性均下降10倍左右。研究胰腺病毒的冻干技术，有利于更好地方便临床应用。

1、材料与方法

1.1 实验材料

1.2 蔗糖（分析纯）；甘露醇注射液（药用辅料）；明胶（BR，上海明胶厂）；L- 半胱氨酸（原料药）；人血白蛋白。

1.3 实验仪器

FD-503冷冻干燥机。

1.4 实验方法

采用冷冻干燥方法，先将制品在 -40 ℃条件下预冻至 -35 ℃，真空度为10Pa以下，每2 h温度上升5℃，至28℃左右保持3 h。冻干保护剂组分为 ：4% 明胶、5% 甘露醇、20%人血白蛋白及3%蔗糖。

3 结论

冻干过程一般包括预冻、升华干燥（第一阶段干燥）、解吸干燥（第二阶段干燥）。在研究腺病毒的冻干时，预冻十分重要，在预冻阶段，降温速度越快越好，这主要还是由冻干机的降温性能决定的，而在此阶段中，要掌握适宜的预冻时间，以确保抽真空之前所有的产品均已冻实，这样就不致因抽真空而喷瓶，并且能减少“粗结晶”的出现，最终利于水分的控制。而在升华干燥阶段，最关键的是要考虑在适宜的时间内使制品干燥成型，那就必须获得最适宜的热量以确保腺病毒制品的升华，这与真空度密切相关。真空度 <10 Pa，并在升华干燥阶段将制品温度维持在 5 ℃为最好。在解吸干燥阶段，主要是去除产品的结合水分，应尽量将产品温度迅速上升到设定的最高温度，温度过低，不能控制水分，温度过高，对于腺病毒来说，又有失活的可能，在此阶段将制品温度维持在 28 ℃左右是最佳的。