【飞诺美色谱】临床样本中类固醇激素的SLE前处理方案
时间：2024-12-11 阅读：54
类固醇激素，又称甾体激素，调节人体多种机能，在临床诊断发挥着重要的作用。在前面的推文中，我们已经分享过一种关于临床检测中19种类固醇激素的反相SPE前处理及相应的LC-MS/MS分析方案，这周我们为大家分享另一种前处理方案：固相支撑液液萃取（Solid-Supported Liquid Extraction, SLE）方法在其中的应用。
SLE操作步骤如下：
| 步骤 | 操作 |
| 样品预处理 | 200µL血清样本与200µL pH为6的乙酸铵水溶液混合 |
| 上样 | 在Novum PRO SLE, MAX 96孔板(Part No.: 8E-S539-5GA)中加入400µL预处理之后的样品，适当施压待样品浸入填料，5分钟后进行洗脱 |
| 洗脱1 | 900µL二氯甲烷或者乙酸乙酯（必要时适当施压） |
| 洗脱2 | 900µL二氯甲烷或者乙酸乙酯（必要时适当施压） |
| 氮吹浓缩 | 45℃ |
| 复溶 | 100µL 0.5mM的氟化铵水溶液/甲醇（60:40, V:V）复溶 |
PS: pre-spiked samples
PoS: post-spiked samples
图6 Kinetex C18分离类固醇相关异构体总离子流图
图7 部分化合物标准曲线
表6 标准曲线，LLOQ和S/N结果汇总
图8 部分化合物LLOQ限度谱图示例
表7 回收率及准确度结果
表8 精密度，基质效应和方法回收率结果
Kinetex 2.6µm C18色谱柱在正离子和负离子模式下在8min内实现了对类固醇相关异构体的良好分离（图6）。使用二氯甲烷洗脱时，除17羟基孕烯醇酮和DHEAS外，其他组分线性良好，R2>0.99；当使用乙酸乙酯洗脱时，所有组分R2>0.98（图7、表6）。对于准确度而言，使用二氯甲烷洗脱时，除17羟基孕烯醇酮和DHEAS外都在80%~112%之间，而使用乙酸乙酯洗脱时候，所有组分准确度都在91%~118%之间（表7）。
此外，使用二氯甲烷洗脱时，回收率在13%~87%之间（表7），其中18羟基皮质酮（13%）、醛固酮（21%）、孕酮（28%）、皮质醇（24%）和可的松（52%）回收率均较低。在使用乙酸乙酯洗脱时，除DHEAS外，所有组分回收率均在84%~110%之间。本次研究中发现DHEAS在SLE方法下基本无回收，建议使用反相SPE方式进行前处理。
本方案中所开发的SLE方法简便有效可重复性强，所用到Novum PRO SLE, MAX 96孔板可实现快速、高通量的样品前处理。分析中用到的Kinetex 2.6µm C18色谱柱也可在8分钟内对相关类固醇化合物进行有效分离，实现LC-MS/MS方法的准确定量。