猪肉中四种硝基呋喃类代谢物残留量测定（SPE-LC/MS/MS）-依国标
时间：2012-12-18 阅读：1629
一．实验目的
本文使用天津博纳艾杰尔科技有限公司的Cleanert® PEP-2固相萃取柱、Venusil® MP C18色谱柱和Qdaura卓睿TM全自动固相萃取仪，遵照中华人民共和国国家标准《猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定（GB/T 20752-2006）》提供的方法，检测猪肉中的4种硝基呋喃类代谢物残留。
二．实验方法
2.1.样品信息
2.2.样品称取和脱脂
称取猪肉样品2g（到0.01g），置于50m棕色离心管中，加入15ml甲醇-水混合溶液（v:v=2：1），均质1min，再用5ml甲醇-水混合溶液洗涤刀头，二者合并8000r/min离心5min，吸取上清液倒掉。
注：为更好的消除基质效应对检测结果造成的影响，可加入同位素内标，采用内标法定量检测。
2.3.水解和衍生（注意避光）
向棕色离心管中加入20ml 0.2mol/l的盐酸溶液，涡旋1min使之混合均匀，之后加入0.3ml浓度为0.05mol/L的2-硝基苯甲醛，混匀，于37℃温水中避光衍生16小时。
2.4.净化处理
将衍生后的样品冷却至室温，加入5ml 0.1mol/l的磷酸氢二钾，并用1 mol/l的氢氧化钠溶液调PH约为7.4，混合均匀。之后用8000r/min离心10min,以小于2ml/min的流速过Cleanert® PEP-2小柱（规格为60mg/3ml，用5ml甲醇、5ml水活化），并用10ml的水洗涤固相萃取小柱，然后负压抽干柱子15min。用5ml乙酸乙酯洗脱于20ml棕色瓶中（此过程可在Qdaura卓睿TM全自动固相萃取仪上完成，仪器方法见附录B）。洗脱液于40℃下氮气吹干。
用样品定容溶液（10ml乙腈，0.3ml的乙酸用水稀释至100ml）定容至1ml，充分溶解，并用0.22µm滤膜过滤。
2.5.检测方法
色谱柱：Venusil® MP C18（2.1×150mm，5µm，100Å）
质谱仪：API 4000+
流动相：A:0.1%甲酸的水溶液 B:0.1%甲酸的乙腈溶液
表1 梯度洗脱条件
| 时间（min） | A（%） | B（%） |
| 0 | 80 | 20 |
| 1 | 80 | 20 |
| 3 | 50 | 50 |
| 7 | 25 | 75 |
| 7.1 | 5 | 95 |
| 10 | 5 | 95 |
| 10.1 | 80 | 20 |
| 16 | 80 | 20 |
流速：0.2mL/min
进样体积：5μL
离子源：电喷雾（ESI），正离子模式
扫描方式：多反应监测（MRM）
表2 质谱仪离子源参数
| Source/Gas | |
| Collision Gas（CAD） | 6 |
| Curtain Gas（CUR） | 15 |
| Ion Source Gas 1（GS 1） | 50 |
| Ion Source Gas 2（GS 2） | 50 |
| Ion Spray Voltage（IS） | 5500 |
| Temperature（TEM） | 600 |
| Interface Heater（ihe） | On |
表3 4种硝基呋喃待测物母离子和子离子参数表
| 物质名称 | 保留时间（min） | 监测离子对 | DP | EP | CE | CXP |
| SEM | 8.10 | 209.1/166.1 | 51 | 10 | 17 | 10 |
| 209.1/192.1 | 51 | 10 | 17 | 10 | ||
| AHD | 8.30 | 249.2/134.1 | 61 | 10 | 20 | 10 |
| 249.2/104.1 | 66 | 10 | 31 | 10 | ||
| AOZ | 8.89 | 236.2/134.1 | 61 | 10 | 20 | 10 |
| 236.2/104.1 | 56 | 10 | 31 | 10 | ||
| AMOZ | 3.12 | 335.3/291.2 | 46 | 10 | 19 | 10 |
| 335.5/128.1 | 46 | 10 | 19 | 10 |
三．实验结果
0.5ppb猪肉基质加标回收实验结果：
表4 猪肉中0.5ppb加标回收实验结果
| 名称 | 1（%） | 2（%） | 3（%） | 平均回收率（%） | RSD（%） |
| 109.43 | 97.84 | 109.75 | 105.67 | 6.42 | |
| SEM | 91.81 | 88.91 | 88.22 | 89.65 | 2.12 |
| AHD | 80.68 | 82.11 | 77.25 | 80.01 | 3.12 |
| AOZ | 83.94 | 80.70 | 80.85 | 81.83 | 0.02 |
四、实验结论
Qdaura卓睿TM全自动固相萃取仪整机采用密封避光设计，用其进行硝基呋喃代谢物的前处理操作，全净化过程可在避光条件下进行，保证检测结果的准确性和重现性。Cleanert® PEP-2固相萃取柱和Venusil® MP C18色谱柱*可以满足国标对于硝基呋喃代谢物的检测要求，结果准确可靠，重现性好。
五、订货信息
表5 实验仪器及耗材
| 产品名称 | 规格 | 订货信息 |
| Qdaura 卓睿™全自动固相萃取 | 4通道24位 | SPE-40 |
| Cleanert® PEP-2固相萃取柱 | 60mg/3ml，50支/包 | PE0603-2 |
| Venusil® MP C18液相色谱柱 | 2.1×150mm，5µm，100Å | VA951502-0 |
附录A
图1 4种硝基呋喃代谢物总离子图
图2 SEM（209/166）质谱图
图3 AOZ（236/134）质谱图
图4 AHD（249/134）质谱图
图5 AMOZ（335/291）质谱图
附录B
图6 卓睿全自动固相萃取仪自动净化方法
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