细菌内毒素检测在医疗器械和注射药物的安全评估中占据核心地位，特别是针对革兰氏阴性细菌释放的高热原性内毒素。传统上，这一检测依赖于天然鲎试剂LAL，但近年来，随着对可持续性和性能优化的追求，重组级联试剂（rCR）PyroSmart NextGen®逐渐崭露头角，成为备受瞩目的替代选择。

一、背景与目的

PyroSmart NextGen®重组鲎试剂是一种基于鲎基因克隆技术开发的重组级联试剂（rCR），旨在提升对特定内毒素的反应性，并减少外部干扰。

本研究旨在全面评估PyroSmart NextGen®重组鲎试剂与LAL试剂在细菌内毒素检测中的等效性，并验证其在平板读数器和试管读数器方法中的性能表现。

二、分析性能验证

根据ICH Q2指南和USP<1225>标准，对PyroSmart NextGen®重组鲎试剂在试管读数器中的性能进行了全面评估，结果显示其在准确度、精确度、特异性、定量限（确定为0.001EU/mL，试剂灵敏度相较于平板读数器检测法提高了5倍）、线性和范围等关键参数上均符合验收标准（表1）。

这些分析测试结果进一步证实了PyroSmart NextGen®重组鲎试剂作为LAL试剂替代品的分析性能和适用性。

三、等效性测试验证

采用平板读数器和试管读数器方法，使用PyroSmart NextGen®重组鲎试剂和两种LAL试剂对100多个过滤水样进行等效性测试。通过相对回收率、线性回归分析和Bland-Altman图等方法，评估两种试剂之间的等效性。

●相对回收率：在测试的102个样本中，91%的平板读数器样品和80%的试管读数器样品的相对回收率结果在50–200%之间（图1），符合美国药典最大试剂变异率的标准。

●线性回归分析：对平板读数器与试管读数器检测的样品分别进行线性回归比较后，发现平板读数器的线性回归斜率为0.9873，95%置信区间为0.8779至1.097；而试管读数器的斜率为1.073，置信区间为0.9769至1.170。

两个读数器的斜率均在0.7至1.3的范围内（图2），进一步证实了PyroSmart NextGen®重组鲎试剂与LAL试剂在检测水样内毒素方面的等效性。

●Bland-Altman图：在图3所示的Bland-Altman图中，平板读数器检测的偏差为-21.43，试管读数器的偏差为-64.58，但两者均有97%的数据点落在95%的一致性上限和下限（LOA）范围内。

根据证明等效性的标准，即至少95%的数据点应位于此区间内，PyroSmart NextGen®重组鲎试剂与LAL试剂在平板读数器和试管读数器方法上的比较均达到了等效性的要求。

四、替代试剂开发与实施的关键考量因素

本研究还强调了替代试剂在开发和实施过程中需要考虑的关键因素，如产品质量、风险管理、生产质量管理体系等。这些因素对于确保替代试剂的可靠性、稳定性和可持续性至关重要。

五、结论

PyroSmart NextGen®重组鲎试剂作为一种重组级联试剂（rCR），在细菌内毒素检测中表现出与LAL试剂相当的检测性能。其灵敏度更高，且能与多种LAL试剂进行等效分析。

这些结果充分证明了PyroSmart NextGen®重组鲎试剂符合美国药典通用通告和要求6.30以及美国食品药品监督管理局工业指南对替代检测方法的要求，是替代LAL试剂的理想选择。