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对于台式扫描电镜需要的生物样品在制备时有哪些要求呢

时间:2021-12-29      阅读:380

  对于台式扫描电镜需要的生物样品在制备时有哪些要求呢?今天就让我们一起来了解一下吧。
 
  台式扫描电镜的样品,通常要求样品*干燥,因为样品室处于高真空状态。坚硬、干燥的材料,如木头、骨头、羽毛、干燥的昆虫或贝壳(包括蛋壳)在检测时所需的进一步处理很少,但是活细胞和组织以及完整的软体生物需要化学固定来保存和稳定它们的结构。
 
  固定通常首先是将样品浸泡在含有化学固定剂(例如戊二醛,有时与甲醛结合)和其他固定剂 的缓冲溶液中,可能还有一步用固定。接下来就是将固定好的组织脱水。
 
  由于空气干燥会导致生物样品塌陷和收缩,所以通常采用有机溶剂(如乙醇或丙酮)置换细胞中的水,再临界干燥流体(如液态二氧化碳)置换这些溶剂来实现固定。二氧化碳终在超临界状态下被去除,因此在干燥过程中样品中不存在气液界面。
 
  干燥样品一般用粘合剂(如环氧树脂或导电双面胶带)固定在样品台上,并在用显微镜检测前溅射金或金/钯合金。如果要对生物体内部的超微结构进行成像,可以对样品进行切片(用切片机)。
 
  如果扫描电镜装备有低温显微镜的冷冻样品台,可以使用冷冻固定,并用低温扫描电子显微镜对冷冻固定的样品进行检测。
 
  冷冻固定的样品可以在真空下在特殊设备中冷冻断裂,以揭示内部结构,在保持冷冻状态的同时溅射涂层并将其转移到扫描电镜冷冻台上低温扫描电子显微镜也适用于对温度敏感的材料如冰和脂肪的成像。
 
  冷冻破碎、冷冻蚀刻或冷冻再破碎是一种特别适用于正面观察类脂膜及其掺杂的蛋白质的制备方法。该制备方法揭示了嵌入在磷脂双分子层的蛋白质。
 
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