氨基酸衍生法数据大PK：OPA or 茚三酮，原来选它
时间：2022-06-16 阅读：1520
氨基酸是构建生物机体的众多生物活性大分子之一，是构建细胞、修复组织的基础材料。它被人体用于制造抗体蛋白、血红蛋白、酶和激素以维持和调节新陈代谢，是一切生命之源。
由于氨基酸的重要性，合适可靠的检测方案将成为评估食品、饲料、药物及生理样品中氨基酸指标的重要选择。
HPLC—柱后衍生法，50多年来作为氨基酸领域的重要检测手段，因为其高效的测试准确性和重现性，深受广大用户的信赖。
氨基酸检测在药物、食品、饲料中的主要应用有
● 通过分析氨基酸组鉴定多肤和蛋白质；
● 原料药和中间体中的杂质和有关物质的测定；
● 药物中单个或总氨基酸的定量， 包括复杂基质中标记物的测定；
● 重组蛋白生产过程的控制；
● 确定氨基酸组成也是保证食品和饲料营养价值的必要条件；
● 用于产品质量及过程监测。
衍生方法介绍
Pickering Laboratories根据上述应用的检测对象的不同，将衍生方法分为OPA衍生法和茚三酮衍生法，两种方法都可以与任何氨基酸阳离子交换柱和洗脱液组合使用。其中我们称为Trione ®的茚三酮试剂，也广泛应用于氨基酸分析仪中。
OPA法与茚三酮法区别见下表：
| 氨基酸衍生法 | ||
|
_ | Trione®试剂分析法 | OPA试剂分析法 |
| 衍生试剂
| TlOO－预混试剂 ；自生产日期起计算， 4个月保质期（950 ml/瓶）
TlOOC －预混试剂；自生产日期起计算， 4个月保质期（950 mL/瓶）
T200 - 2部分试剂，混合后使用，从生产之日起12个月保质期；4组／箱 (900mL／瓶） | OD104－氨基酸分析用OPA稀释液；
O120-OPA试剂（5g／瓶）
3700-2000 －疏基化合物。（10g／瓶）
这三种产品都是用于氨基酸OPA分析法 |
| 适用样品
| 一级和二级氨基酸 | 一级氨基酸
在与OPA反应之前需要检测二级氨基酸氧化步骤。使用氧化步骤时，一级氨基酸的检测灵敏度会有所降低。 |
| 检测器 | UV/VIS | FLD |
| 仪器灵敏度 | 10 pmole （在色谱柱上） | 2 pmole （在色谱柱上） |
| 色谱柱&洗脱液 | 适用于任何阳离子交换柱氨基酸分析法 | 与任何用于氨基酸分析的阳离子交换柱配合使用 |
| 配置 | 单泵Ony×PCXI vector PCX+ 0.5 m L反应器 | 单泵Ony×PCX/ vector PCX+ 0.15 ml反应器。
＊需要带有0.5 mL和0.1 mL反应器的双泵OnyxPCX来检测二级氨基酸。 在此模式下， 初级氨基酸的灵敏度会降低。 |
色谱柱的选择
图1：钠柱氨基酸分析选择
图2：锂柱氨基酸分析选择
图3：氨基酸标品
图4：豆粕样品
图5：水解单克隆样品
Pickering产品
完整解决方案
欧洲药典8.0对于氨基酸的柱后衍生茚三酮法做了详细的要求，药典对于包括化学、 动物、 人或草药来源的活性物质、赋形剂和制剂，顺势疗法制剂，抗生素，制剂和容器等都有所要求。
Pickering Laboratories 将欧洲药典作为测试依据，为客户提供完整的氨基酸分析解决方案。
Pickering 柱后衍生仪
解决方案包括Onyx PCX/Vector PCX 柱后衍生仪器、分析柱、保护柱、缓冲液和Trione ®茚三酮试剂。并且对方法进行了优化， 在符合药典各项体系适宜性要求的同时，提高了分析的灵敏度及分析效率。
Pickering全套试剂包
图6：依据欧洲药典8.0法测试氨基酸
关于Pickering Laboratories
美国Pickering Laboratories公司是仅有的专业提供人工测试体液和柱后衍生化学试剂、色谱柱、分析方法等柱后衍生分析整体解决方案的机构，其不断创新及良好的信誉被众多的美国政府机构如EPA、ATF、FDA、AOAC和著名的厂商所认可。