结肠炎模型诱导方案

背景简介：

肠炎是一种病因不明的多因素疾病，主要的肠炎有2种，溃疡性结肠炎和克罗恩病。溃疡性结肠炎主要影响大肠或结肠，而可能影响胃肠道的任何部分。为了研究溃疡性结肠炎，葡聚糖硫酸钠（DSS）常被用于诱导实验动物的结肠炎通过调整DSS浓度或给药周期，很容易诱发急性、慢性或复发性结肠炎。我公司为科研用户提供用于诱导结肠炎的右旋糖酐硫酸钠（DSS），以及评估其特征和并发症的工具，用于模拟人结肠炎。

操作流程：

1）急性肠炎造模：选取成年动物正常饲养1-2周→2-5%DSS自由饮5-7天观察症状体征。

2) 慢性肠炎造模：选取成年动物正常饲养1-2周→2-3%DSS自由饮5-7天观察症状体征→停止饮用DSS，改正常饮水7-14天→重复2-3%DSS自由饮5-7天观察症状体征→重复停止饮用DSS，改正常饮水7-14天

3) 灌胃造模：每天分别于10:00, 14:00和18:00给予2%DSS溶液灌胃，每次30ml/kg，不另予饮水。每天末次灌胃后给予足量混合配方颗粒饲料，次日8:00取走饲料。造模时间9天。

常见问题

1. Q: 成功诱导结肠炎动物模型的关键因素是什么？

A: DSS的分子量、DSS溶液的浓度、动物的种类和品系以及提供给动物的饲料种类。

2. Q: DSS造模的操作流程？

1）急性肠炎造模：选取成年动物正常饲养1-2周→2-5%DSS自由饮5-7天观察症状体征。

2) 慢性肠炎造模：选取成年动物正常饲养1-2周→2-3%DSS自由饮5-7天观察症状体征→停止饮用DSS，改正常饮水7-14天→重复2-3%DSS自由饮5-7天观察症状体征→重复停止饮用DSS，改正常饮水7-14天

3) 灌胃造模：每天分别于10:00, 14:00和18:00给予2%DSS溶液灌胃，每次30ml/kg，不另予饮水。每天末次灌胃后给予足量混合配方颗粒饲料，次日8:00取走饲料。造模时间9天。 参考文献：葡聚糖硫酸钠自由饮用与定量灌胃诱导小鼠急性结肠炎模型的比较研究，胃肠病学 2009，14（1），27-30。

3. Q: 诱导结肠炎动物模型时需要注意哪些条件？

1) 用无菌水配制DSS溶液，详细的浓度请参考我们的应用指南。使用前，建议使用 0.22 µm的过滤。

2) 每1-2天更换一次新配置的DSS溶液。

3) 为了清楚地观察造模进展, 建议每个笼子2-3只动物，最多不超过每个笼子5只动物。

4) 使所有动物的生存条件一致。

4. Q: DSS引起结肠炎的原理是什么？

参考文献：Gastroenterology, 2002, 123(1):256-270;J Immunol, 2004, 172(9): 5664-5675; 胃肠病学和肝病学杂志 2013, 22(12): 1221-1224; 炎性肠病，1998，124-125；J Pharmacol Toxi-colog Methods, 2004, 50(1):81-81

5. Q: 小鼠和大鼠每天的饮水量是多少？

小鼠每天的饮水量为7-10ml，大鼠11ml/100g体重/天。

6. Q: 分子量是否影响结肠炎模型的建立结果？

36,000 - 50,000Da是结肠炎模型建立的最佳DSS分子量范围。低分子量DSS具有较弱的炎性作用，分子量越大，吸收越困难。

7. Q: 为什么不同批次的DSS使用浓度会有差异？

DSS是葡聚糖聚合物，分子量为平均分子量，每个批次之间会有分子量的差异，而分子量对肠炎造模有影响。通常DSS批间比较稳定，但是也有少部分批间差会大一些，所以建议客户根据自己的实验需求，购买足够的同一批次产品，或者换用批次之前进行预实验。

8. Q: 小鼠3%的DSS饮用3天后没有出现明显的体重下降？

某些动物出现反应慢，甚至在饮用DSS第5天才出现体重下降，属于正常现象。如果7天未出现明显症状，则重新进行实验，并增加0.5-1%的DSS的饮用浓度。

9. Q: DSS造模后出现小肠出血正常吗？

DSS饮用浓度过高会导致小肠出血，轻度小肠出血无明显影响，若出血过多，可降低DSS的浓度。

10. Q: DSS饮用后体重下降明显，但是病理切片HE染色没有炎症现象

DSS的饮用达到一定阈值才能成功诱导肠炎，阈值如果达不到，体重可以出现下降，但是病理无炎症表现。

11. Q: 为什么同一笼的小鼠出现的症状有差异？

动物之间存在个体差异，不同的动物饮水量可能不同，而且不同的动物对DSS的耐受性也不同。

12. Q: 为什么慢性肠炎模型的第二个周期饮用相同浓度的DSS，动物出现的症状没有第一个周期明显？

动物饮用DSS一段时间后会有耐受性，所以第二个周期出现症状减弱为正常现象。

13. Q: DSS造模与TNBS造模有什么不同？

TNBS诱导的肠炎与克隆恩病相似，与溃疡性结肠炎相似度低。TNBS致炎病程更长，个体差异更大。

14. Q: 是否可以高压灭菌？

不可以，会导致DSS的分子结构发生变化。

15. Q: 从DSS诱导小鼠的粪便样本中提取DNA，结肠组织中提取的RNA中会有DSS残留，会抑制下游PCR，RT-PCR实验，如何处理？

精胺可以去除DSS对PCR的抑制。参考文献：Journal of Microbiological Methods ，2018 Jan, 144: 1-7

16. Q: DSS造模期间是否可以进行不同时间点的检测，观察DSS饮用前期什么时间会造成上皮屏障破坏？

可以，一般2天造成上皮屏障破坏，可以选择3、5、7天；进行病理检测。

17. Q: 小鼠与大鼠的品系？

小鼠常用品系C57背景纯，诱导肠炎更稳定。使用Babl/c小鼠时，要做好预实验；大鼠常用品系SD和Wistar

18. Q: 小鼠的体重建议？

建议按照周龄来选择，推荐8-12周小鼠，体重约22g左右。

19. Q: DSS可以用于细胞实验吗？

可以，参考文献：YAP triggers the Wnt/β-catenin signaling pathway and promotes enterocyte self-renewal, regeneration and tumorigenesis after DSS-induced injury. cell death and disease, 2018(9):153

20. Q: DSS可以用超声进行溶解吗，会破坏其分子结构吗？

DSS易溶解，无需超声即可溶解。如果必须使用超声，也是可以的。

21. Q: DSS除引起结肠损伤，还会引起肝脏，脾脏损伤吗？

DSS除导致肠道损伤外，会加速非酒精性肝硬化的进展，部分客户偶尔发现对正常动物的肝脏也会有损伤，但对脾脏的损伤未见有报道。

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