钙离子荧光探针FLUO-3AM应用详解
时间：2013-06-17 阅读：3050
| 一、Fluo-3AM的理化性质 颜色及形状：橘红色液体 纯度：，大于95%（液相） 溶解性：溶于DMSO 吸收波长/发射波长：506nm /526nm（低/高钙） 消散系数：86000/Mcm（506nm） 保存与使用：粉状的FLUO-3AM应保存于-20度以上。建议使用DMSO作为溶媒。在溶解前，FLUO-3AM和DMSO均须放置至室温。溶解过程可能会比较慢。用无水的DMSO溶解的FLUO-3AM长期保存，应严格密封，并保存于-20度。使用前，将保存液放置至室温后再打开。可避免AM探针在长期的保存过程中水解。 二、Fluo-3AM的工作原理 FLUO-3广泛用于长波长的荧光钙指示剂。其在506NM处被吸收，可以被氩离子激光的488nm激发光激发，便于检测。FLUO-3在没有同钙结合的情况下，无荧光产生。但是，在与钙结合后，荧光（526nm）增强至少40倍。Fluo-3 AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3 AM的荧光非常弱，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-3 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内。Fluo-3可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，zui大激发波长为506nm，zui大发射波长为526nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右，发射波长为525-530nm。 三、Fluo-3AM的应用 1、过程概述 用于细胞内钙离子检测时，Fluo-3 AM的常用浓度为0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-3 AM的适当溶液和细胞一起在20-37℃孵育15-60分钟进行荧光探针装载，随后适当洗涤，洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-3 AM在细胞内*转变成Fluo-3。然后在流式细胞仪上进行检测。 2、Fluo-3AM使用液的配置 100ug的Fluo-3AM，分子量是1219.9。按实际需要的摩尔浓度折算，无水DMSO溶解。一般配置成1~5mM的DMSO储存液。如出现难溶现象，可以用20%的F127的DMSO溶液助溶。 四、注意事项： 1、荧光染料有淬灭问题，应尽量避光保存； 2、实验时注意个人防护，戴手套、口罩； 五、应用举例 （一）配置与贮存 1、基本信息 分子量：1129.9 包装单位重量：0.1mg 贮存浓度：5000μM/L 使用终浓度：5μM/L 2、贮存液的配制（5000μM/L） 按照说明书，计算0.1mg 的摩尔数为0.089μM ，则需加DMSO18uL，微量加样器反复吹打混匀后分装，按说明书要求避光-20度冰冻保存。 （二）应用 每毫升细胞悬液中加入1 uL，则Fluo-3AM的使用终浓度为5μM/L 订购信息：
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