葡聚糖凝胶的使用方法
时间：2016-08-16 阅读：7763
葡聚糖凝胶使用方法：
1. 乙醇浸泡：在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干;
2. 无盐水浸泡：室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的*溶胀，然后；
3. 盐酸浸泡：在常温下再用0.2N HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗只中性；
4. 将溶胀好的凝胶脱气后（真空抽滤或超声波）根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层；
5. 上样前平衡层析柱少3-5 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值）；
6. 凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20% 的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1 即可；
7. 洗脱方法：可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以*分离纯化；
8. 在位清洗（CIP）凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以少三个柱体积平衡缓冲液再生。