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关于尺寸排阻的保存及清洗你需要知道的

时间:2021-04-26      阅读:2106

   尺寸排阻是按分子大小顺序进行分离的一种色谱方法,体积大的分子不能渗透到凝胶孔穴中去而被排阻,较早的淋洗出来;中等体积的分子部分渗透;小分子可*渗透入内,后洗出色谱柱。样品分子基本按其分子大小先后排阻,从柱中流出。被广泛应用于大分子分级,即用来分析大分子物质相对分子质量的分布。
  尺寸排阻色谱柱的保存:日常使用中,SepaxSEC色谱柱建议保存在150mM磷酸盐缓冲液中(pH7.0)。如长期不用时,可将色谱柱保存至20%乙醇中,以防止菌体污染。(注:可根据具体使用条件选择保存方式,如实验条件为缓冲盐体系,建议保存在150mM磷酸盐缓冲液中,pH7.0。若实验条件为有机溶剂体系,建议保存在20%乙醇中。)
  尺寸排阻色谱柱的清洗:多次使用后某些样品可能会吸附到入口筛板或填料上,当积累至一定程度时会出现压力升高并伴随峰型展宽的现象,此时需要清洗色谱柱。一般流程为:断开检测器,反接色谱柱,在低于50%大推荐流速下用清洗液冲洗10-15倍柱体积。一般有:
  0.5M硫酸钠溶液(pH3.0):适用于碱性蛋白的清洗;
  10%-20%有机溶剂(乙醇、异丙醇、乙腈):疏水性蛋白的清洗;
  4M尿素(pH7.0):适用于易聚集蛋白样品的清洗。
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