寡核苷酸类药物检测之尺寸排阻（SEC）色谱柱

随着寡核苷酸药物的研发步伐越来越快，对高纯度寡核苷酸产品的需求也日趋旺盛。在今天的推送内容里，我们将介绍尺寸排阻色谱法在寡核苷酸药物质量控制中的应用。

在寡核苷酸的分析中，尺寸排阻分离模式是基于碱基数量、磷酸基不同导致的分子量差别进行分离，通常用于简单的质量控制或纯度研究。该模式的优点是可以使用接近生理条件的洗脱溶液进行等度分离。有时也会添加水溶性有机溶剂来抑制疏水吸附。

分析不同碱基数目的寡核苷酸

下图是采用两根串联的SEC色谱柱TSKgel UP-SW2000来区分长度相差一个碱基的寡核苷酸混合物 (20-mer和N-1 19-mer)。

TSKgel UP-SW2000是东曹生命科学最新开发的粒径2μm、孔径12.5nm的硅胶基质SEC色谱柱，主要用于分离分子量范围为1-150kDa的小蛋白、肽和寡核苷酸等生物分子。该色谱柱兼容HPLC和UHPLC系统，因此也能够从传统的HPLC-SEC方法转换到UHPLC。

下图是使用TSKgel G2000SWXL色谱柱分离不同碱基数量的合成寡核苷酸混合物的谱图。为了抑制核酸酶活性，有时会在流动相中添加EDTA等约1 mmol/L的螯合剂。

SEC法分离脂质体包被的siRNA

下图是使用TSKgel SuperSW2000色谱柱对天然型DNA核酸药物Defitelio进行质量分析的示例。

参考文献：Handbook of analysis of oligonucleotides and related Products, Feb.23 (2011) 125, Edited by J.V. Bonilla et al.

寡核苷酸分析用SEC色谱柱

下表中列出了适用于核酸分离的SEC色谱柱。对于＜375 bp的短链核酸或寡核苷酸，UP-SW3000、UP-SW2000、G3000SWXL以及G2000SWXL这几款色谱柱都是比较推荐的。