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软骨素酶ABC酶解--液相色谱法测定鱼翅中的透明质酸

时间:2012-08-06      阅读:3590

1.仪器与试剂

配置紫外可见检测器的HP-1100型液相色谱仪(美国惠普公司);DU-600型紫外扫描仪(瑞士Beckman公司);透明质酸、透明质酸二糖、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、胶原酶、木瓜蛋白酶、软骨素酶ABC均为Sigman产品;乙腈为色谱纯;二次蒸馏水;其他所用试剂均为分析纯。

2.色谱条件

色谱柱:Agilent ZORBAX 糖分析柱(4.6mmi.d. x 250mm, 5µm);检测器及检测波长:紫外可见检测器,226nm;流动相V(乙腈):V0.5%磷酸)=2:98;用0.45µm滤膜抽吸过滤;进样量10µL;流速1mlmin;室温下分析。

3.溶液的配制

透明质酸二糖标准储备液的配制:准确称取标准品,用0.2mol<LTris-HClPh8.0)缓冲溶液溶解,稀释定容为1gL的标准贮备液,于冰箱中存放。实验时,其他浓度的标准液均由此溶液用0.2molL Tris-HClPh8.0)稀释而成。其他所用溶液均按常规方法配制而成。

 

 

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