软骨素酶ABC酶解--液相色谱法测定鱼翅中的透明质酸
时间:2012-08-06 阅读:3590
1.仪器与试剂 配置紫外可见检测器的HP-1100型液相色谱仪(美国惠普公司);DU-600型紫外扫描仪(瑞士Beckman公司);透明质酸、透明质酸二糖、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、胶原酶、木瓜蛋白酶、软骨素酶ABC均为Sigman产品;乙腈为色谱纯;二次蒸馏水;其他所用试剂均为分析纯。 2.色谱条件 色谱柱:Agilent ZORBAX 糖分析柱(4.6mmi.d. x 250mm, 5µm);检测器及检测波长:紫外可见检测器,226nm;流动相V(乙腈):V(0.5%磷酸)=2:98;用0.45µm滤膜抽吸过滤;进样量10µL;流速1ml/min;室温下分析。 3.溶液的配制 透明质酸二糖标准储备液的配制:准确称取标准品,用0.2mol<LTris-HCl(Ph8.0)缓冲溶液溶解,稀释定容为1g/L的标准贮备液,于冰箱中存放。实验时,其他浓度的标准液均由此溶液用0.2mol/L Tris-HCl(Ph8.0)稀释而成。其他所用溶液均按常规方法配制而成。