新型冠状病毒PCR实验室解决方案
时间:2020-02-06 阅读:5951
自新型冠状病毒发现以来,特别是PCR实验室新型冠状病毒核酸检测工作任务艰巨。先介绍一下PCR检测的流程:
1试剂制备区
功能:主要是作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备,试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区,不得经过其它区域。试剂原材料需贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。所需要的仪器设备:
天平(用于精确称量各类试剂)→超净工作台(涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成)→移液器(准确量取特定体积溶液20-100ul)→纯水(超纯水18.2ΩM.CM)→药品冷藏箱(短期保存 )→试剂低温冰箱(可选2-8°、-20℃)→混匀仪(移取样本前需要混匀)(推荐艾本森品牌:MixMax漩涡混匀仪)→消毒车(空间环境消毒)→灭菌锅(实验室物品、试剂、培养基消毒灭菌)→PH计(配置试剂是精确测量PH值)
2 样本制备区
功能:临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时DNA的合成。所需要的仪器设备
生物安全柜(为了防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散)→样本低温冰箱(-20℃,-80℃保存样本及DNA)→高速台式冷冻离心机(用于收集微生物菌体、细胞碎片以及其他沉淀物,有些样品由于在常温下不太稳定,需要低温环境)→恒温金属浴(用于DNA杂交过程中水浴控温)(HtPot40恒温金属浴)→移液器(准确量取特定体积溶液)→紫外灯或者消毒车(空间环境消毒)→混匀仪(移取样本前需要混匀)(推荐艾本森品牌:MixMax漩涡混匀仪)→超净工作台(涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成)→低温摇床(用于大肠杆菌和酵母菌的振荡培养)→磁力搅拌器(加速溶解固体内容物 )
3核酸扩增区
功能:主要是DNA扩增,已制备的DNA模板和合成的DNA和主反应混合液,制备成反应混合液等,也可以在本区域内进行。在PCR测定中,通常在扩增后须打开反应管。
基因扩增仪 (基因检测DNA/RNA扩增)→荧光定量PCR仪(核酸定量分析)→核酸提取仪(样品DNA/RNA提取)→移液器(准确量取特定体积溶液)→紫外灯或者消毒车 (空间环境消毒)→超净工作台(涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成 )→纯水装置(用于PCR,DNA测序需要超纯水)
4产物分析区
功能:主要进行的操作为扩增片段的测定,如使用全自动封闭分析仪器检测,需要仪器设备:
基因扩增仪 (基因检测DNA/RNA扩增)→荧光定量PCR仪(核酸定量分析)→核酸提取仪(样品DNA/RNA提取)→移液器(准确量取特定体积溶液)→紫外灯或者消毒车 (空间环境消毒)→超净工作台(涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成 )→纯水装置(用于PCR,DNA测序需要超纯水
电泳仪(水平电泳用于核酸DNA/RNA检测,垂直电泳用于蛋白检测,转印电泳用于将蛋白转印到膜上做western检测)→凝胶成像系统/紫外检测仪(用于核酸琼脂电泳和蛋白聚丙酰胺的观察和拍照,紫外分析仪用于染色后核酸琼脂电泳胶观察,不能连接电脑)→电炉(电泳琼脂凝胶加热融化)