显微课堂 | 使用安装框架进行光片样品准备
时间：2024-09-03 阅读：221
样品处理通常是光片显微镜研究中的一个关键话题。徕卡显微系统的TCS SP8 DLS将光片技术集成到倒置共聚焦平台中，因此可以利用关于样品安装和XY-stage功能的一般原则。本文将描述一组安装框架，这些框架不仅允许准备更多的样品，尤其是在使用诸如BABB（苯甲醇苯甲酸酯）等潜在有害的安装介质时，亦具有广泛的适用性。
样品架：
这里介绍的样品架是为数字光片（DLS）成像设计的，但同样适用于传统的直立式和倒置式显微镜成像。
简介：
在使用SP8 DLS模块进行成像时，样品被放置在TwinFlect镜子之间。
X方向的移动范围由所使用的TwinFlect镜子的距离（2.5毫米、5毫米或7.8毫米）决定。最大移动范围大约是镜子之间距离的一半。
图 1：由 TwinFlect 镜子定义的 x 方向移动范围。y 方向的移动范围由安装盘的大小决定。
Y方向的移动范围则由样品架的形状和大小（如培养皿）决定。
对于标准的35毫米培养皿（玻璃底直径20毫米），Y方向的移动范围相对有限，不会接触到皿的边缘：
图 2：使用标准 35 毫米培养皿时 y 方向的受限移动范围。
使用矩形24 x 50毫米盖玻片的样品夹时，Y方向的移动范围增加，使得可以使用更大或更长的样品。此外，这种设计还能够增加在一次实验中成像的样品数量，非常适合多位置实验。
图 3：矩形 24 x 50 mm 盖玻片在 y 方向上的行程范围增加。
材料与方法
安装框架套件（#158007063）包含一个用于24 x 50毫米玻璃盖玻片的样品夹，以及一个用于直径30毫米圆形盖玻片的样品夹。请注意，玻璃盖片不包含在内。
图 4：安装框架套件（样品夹矩形 24 x 50 mm + 直径 30 mm 的圆形样品夹）
24 x 50 mm 盖玻片的样品夹仅与以下 z-Galvo 载物台插入件兼容：
158004118 可旋转插入件反向
158004119 通用插入件
封闭样品架/附加玻璃盖片
对于在水溶液中的成像，可以使用硅胶（如Elastosil® 43，Wacker）或双组分Twinsil®来附加玻璃盖片。
这些样品架也适用于在更具侵蚀性的溶液中成像，例如BABB（苯甲醇/苯甲酸苄酯）。由于BABB可以溶解多种材料，因此需要使用专门类型的硅胶来密封容器，例如Elastosil® E41（Wacker）（与德国维尔茨堡大学鲁道夫·维尔乔中心的尤尔根·皮内克的个人沟通）。
1
在样品架底部的凹槽内缘涂抹硅胶/双硅胶。
2
添加一片玻璃盖片，并轻轻按压以确保其均匀贴合，以便在所有点上形成良好的密封。
3
要检查腔体密封，请在样品架中加入一些蒸馏水，看看是否有泄漏发生。
上样
在组装好带有相应玻璃盖片的安装框后，您可以选择以下不同的样品安装方式：
基于琼脂糖的上样
1
在盖片表面覆盖一层薄薄的琼脂糖（0.5-1毫米），待其聚合后，形成样品的支撑层。
2
然后将您的样品悬浮在液体琼脂糖中，放置在支撑层上
3
将您的样本（理想情况下呈一条直线）对齐以进行成像
4
从侧面去除多余的琼脂糖以为镜子留出空间。
U 型玻璃毛细管
按照《科学实验室》文章中描述的协议进行：DLS 样品准备：使用 U 型玻璃毛细管进行样品安装。
用于固定清理组织的超级胶水
更大的（已透明化的）样本在直接粘贴到玻璃盖玻片上时，可以与样本架一起使用。
图5展示了在标准玻璃底培养皿中安装组织样本的一种简单方法。
客户申请 DLS 准备
在通过光片显微镜扫描的 ECi 透明化肾脏的一部分中，以实现3D 肾小球的可视化。感谢海德堡大学曼海姆医学院的Norbert Gretz教授。
参考文献：
1.Huang J, Brenna C, Khan AUM, Daniele C, Rudolf R, Heuveline V, Gretz N , A cationic near infrared fluorescent agent and ethyl-cinnamate tissue clearing protocol for vascular staining and imaging, Sci Rep. 2019 Jan 24;9(1):521
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