在ELISA试剂盒实验操作所要求的条件是比较严格的，无论是对实验的硬件条件还是对实验的操作人员的技术要求，都是如此。下面所提到的就是一些在进行ELISA实验时所要注意15个问题:

1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定，但有专业人员进行矫正。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。
4、实验时，要使底物避光保存。
5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。
8、温浴时，要用封板膜封好酶标板，防止水分的蒸发。
9、洗板时，每次洗液加入后，应静置1-2分钟，使清洗更加*。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
10、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。
11、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。
12、待检样品要澄清，否则会影响结果。
13、温浴时间应遵守试剂盒规定。
14、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。
15、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。

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