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介绍一种提高慢病毒回收率与纯化效率的新技术

时间:2024-03-14      阅读:368

病毒载体技术的研究不断深入和发展,为遗传物质递送提供了理想的工具,成为目前细胞治疗与基因治疗的主要递送技术。然而,研究人员在细胞基因治疗产品的纯化工艺方面却面临着重大挑战。目前的纯化工艺大都来源于为单克隆抗体开发的解决方案,不适合用于病毒载体的纯化。而基于传统树脂色谱法有明显的局限性,如回收率低、耗时且成本高。

AstreAdept™ 是一种新型的纳米纤维材料,可有效解决粒径大且脆弱的病毒颗粒纯化面临的耗时长、回收率低且杂质含量高等问题。在这里,我们展示了该技术整合到离心管形式的Nereus LentiHERO™,并将其优势带到实验室规模的病毒载体纯化中。

 

高瞬时结合表面积,更高效地处理慢病毒载体
AstreAdept™采用两种不同的电纺材料(纤维素:575nm(+/- 50 nm)和非纤维素:200nm(+/- 50 nm))交织形成特性*的复合膜结构,可使产物溶液在高流速条件下快速扩散到高结合表面积(图1),实现wu阻碍的进入孔道。将该技术整合到层析纯化基质的LentiHEROTM将慢病毒纯化带入一个新的纪元。

1.  AstreAdept™ 新型的复合纳米纤维材料解决脆弱大分子纯化的瓶颈问题。

wu阻碍液体流动系统优点:


  • 结合表面积更大

  • 高回收率

  • 高流速


 

Nereus LentiHERO™ 用于慢病毒纯化

2. Nereus LentiHERO™ 仅需5步离心即可实现慢病毒快速纯化

 

 

Nereus LentiHERO™显著提高慢病毒回收率

高动态结合载量与高回收率,提升实验室规模慢病毒生产效率。

3. 15%穿透时,每根离心柱的动态结合载量1.9E+10。 Nereus LentiHERO™离心柱以20 mv/min的速度上样,流穿收集在10mL液体中,使用p24 ELISA分析,基于上样的总VP,计算VP穿透百分比。

 

4. 有无血清培养体系慢病毒回收率:纯化后样品中慢病毒/病毒原液%

血清(-) n=3,血清(+)n=2

 

• 高流速条件下不影响动态结合载量

• 保留时间 < 1s

• 无血清培养体系LV回收率>60%

 

Nereus LentiHEROTM宿主细胞蛋白残留降低95%以上
降低HCP残留在实验室规模的样品生产同样重要,可显著减少非必要的免疫反应。

Nereus LentiHERO™纯化的样品

• 95% 宿主蛋白的去除

• 通过SDS-PAGE,洗脱液中检测不到宿主蛋白

• 不论培养体系中有无血清,都能显著去除宿主蛋白

5. Nereus LentiHEROTM可去除95% 以上宿主蛋白

 

Nereus LentiHEROTM对病毒结构和感染效力影响很小

Nereus LentiHERO™ 纯化后的慢病毒颗粒保持了原有的功能、形态和大小

• 重要结构蛋白完整,如编码了衣壳、基质与核衣壳的Gag蛋白

• 慢病毒颗粒大小和形态无改变

• 纯化后的慢病毒感染活力未降低

6. 通过WB、电镜和细胞感染实验分别对比了Nereus LentiHERO™ 纯化前后慢病毒结构蛋白的完整性、颗粒形状大小与感染活力均未受到显著影响。

 

Nereus LentiHEROTM兼具了产量、纯度和时间效益

• 一台台式离心机即可实现高通量病毒纯化

• 宿主细胞蛋白去除的同时样品洗脱体积减小(浓缩)

• 高纯度、小体积样品的进一步浓缩更节省时间

 

 

Nereus LentiHERO™ 性能总结

• 一种新型基于纳米纤维膜的AstreAdept™ 技术为病毒载体纯化工艺赋能

• 易于操作的设计,实现了功能性慢病毒颗粒的快速纯化和高回收率

• 能显著降低如宿主细胞蛋白(HCP)等杂质的含量

• 可以同时处理多个样品突破病毒载体开发样品制备的瓶颈

 

7. LV 纯化高得率,高通量,高纯度,适用于小体积慢病毒样本,操作时间短。

 

综上所述,该技术提供了一种更具成本效益和时间效率的方案,提高研究人员对新型细胞和基因治疗项目的开发,助推新型生物治疗药物惠及广大患者。

 

产品信息*

品名

货号

规格

Nereus LentiHEROTM

NL100100

2 unit pack

*采用相同技术适用于工艺放大的LentiHERO® 1LentiHERO® 10预装柱产品已上市,欢迎咨询Astrea Bioseparations代理商北京西美杰科技有限公司。

 

Astrea Bioseparations1987年孵化自剑桥大学,拥有超过30年层析介质研发和生产经验,是层析介质产品与服务供应商。目前使用Astrea的产品已有超过21个生产工艺通过了FDAEMA的批准。Astrea在希腊语中是星际少女的意思,象征着正义、纯真、纯洁和精确。使用Astrea Bioseparations这个名字体现了我们在工作中对纯洁、精确和人性一如既往的关注。Astrea Bioseparations在全球拥有3个研发和生产基地,专注为生物大分子和CGT领域提供行业层析介质和技术服务。Astrea Bioseparations推出的基于纳米纤维的新型层析技术,解决了传统生物分离工具载量低和工艺耗时问题,实现更快、更环保、更具成本效益的纯化过程,符合当今生物治疗创新的需求。


 

北京西美杰科技有限公司是Astrea Bioseparations品牌在中国的一级代理商,北京西美杰是Astrea Bioseparations 代理,Astrea Bioseparations 中国代理,Astrea Bioseparations 北京代理,Astrea Bioseparations 总代理,Astrea Bioseparations 上海代理,,Astrea Bioseparations 西北代理,Astrea Bioseparations 西南代理,Astrea Bioseparations 东北代理,Astrea Bioseparations 华北代理,Astrea Bioseparations 华南代理,Astrea Bioseparations 华中代理,负责Astrea Bioseparations 在中国的相关业务。


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