大（小）鼠外周血中性粒细胞分离液 KIT 说明书   大（小）鼠外周血中性粒细胞分离液 KIT 说明书

【产品规格】

200ml/Kit

【产品组成】

为方便广大用户使用，试剂内容如下：

【实验前准备】

适用仪器：zui大离心力可达 1200g 的水平转子离心机

【检验方法】

全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。

1取一支 15ml 离心管，先加入中性粒细胞分离液试剂 A：3ml，后加入 80%浓度试剂 A溶液（中性粒细胞分离液试剂 A：样本稀释   液=4：1 的混合液）：1.5ml，形成梯度界面。

2制备血液样本：抗凝血液与红细胞沉降液按 1：1 比例混匀后，小心加于分离液梯度界面之上，800g 离心 20min。

3离心后，血浆层下出现两层白色环状细胞层，取下层白色环状中性粒细胞层（会有少量红细胞混杂），加 3-5 倍体积清洗液混匀，400g 离心 10min。

4离心后弃上清，后可通过两种方法去除红细胞。

方法一：细胞沉淀用红细胞裂解液去除红细胞（具体方法参见“红细胞裂解液说明书”）。

方法二：

1细胞沉淀用 1ml 红细胞沉降液重悬，加于 3ml 中性粒细胞分离液试剂 A 之液面上，400g 离心 20min。

2取白色环状细胞层，加 3-5 倍体积清洗液混匀，250g 离心 10min，重复洗涤 2-3 次，获得目的细胞（如仍有少量红细胞混杂，使用红细胞裂解液去除红细胞）。

【注意事项】

1全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得*的实验结果，在取血 2h 内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

2本实验不使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

3分离液用量大于血液样本时，分离效果更佳。

4请勿使用具有红细胞保护成分的抗凝剂，否则影响分离效果（离心后，红细胞不能*沉至离心管底部）。

【储存条件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

【参考值（参考范围）】

本实验中性粒细胞提取率大于 80%。

【相关实验技术方案】

1所获得中性粒细胞的培养技术。

2所获得中性粒细胞的核酸提取技术。

3所获得中性粒细胞的鉴定方法

A.流式细胞技术

B.免疫组化技术

C.原位杂交技术

D.PCR 技术

【可能存在的问题及解决方法】

1.由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：

?2本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。

3本分离液依照标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可能出现红细胞沉降不*的情况，可以适当加大离心转速。

注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到*分离效果，离心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。