通用型细胞分离液操作说明
时间:2014-08-12 阅读:1586
通用型细胞分离液操作说明和使用保存中的注意事项:(各种动物)
本品为带有乳光或微乳光的灭菌水溶液。主要成分是葡聚糖与泛影酸葡甲胺。适用于从血液
及组织匀浆中(小牛血清悬起匀浆的细胞 1X107/ml)分离所需细胞,在医疗和医学生物中广泛
应用。
其他人及动物多种比重细胞分离液。注:因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞
带电不同,所以用户在定制分离液时应提供所需分离液的比重、动物的种属及被分离细胞的名称。
使用方法
例:取新鲜抗凝血1ml,与Hank’s 液1:1 混匀后,小心加于2ml 的细胞分离液之液面上,以1500
转/分离心(半径15cm 水平转子)1 分钟,注:调整离心速度和时间,以下细胞分层可为不同细胞
分层,收集所需细胞层即可,离心管中由上至下细胞分四层。*层;为血浆或组织匀浆液层。
第二层;为环状乳白色细胞层。第三层;为透明分离液层。第四层;为红细胞层(此红细胞层,
表面有悬起的部分白细胞层收集此层细胞即为白细胞。收集第二层的细胞(粒细胞和单核细胞),
放入含 Hank’s 液15 毫升的试管中,充分混匀后,以1500-2000 转/分离心10 分钟。吸去上清液,
沉淀经反复洗2 次。用Hank’s 液或小牛血清重新悬起沉淀的细胞(1X107/ml)用相应动物的单
核细胞分离液去除或收集单核细胞备用。(参照淋巴细胞和单核细胞分离方法)其余即为粒细胞,
收集备用。
注意事项
1. 启封后应置4℃保存避免微生物的污染。 2. 细胞分离液从冰箱取出后,不可立即使用,需待
溶液温度升至室温时,摇匀后使用。 3. 整个分离过程中,温度应控制在18-28℃且在无菌环境
下,避免微生物的污染,否则会影响分离质量。
应 用
-从动物血液及组织中分离淋巴细胞
特点
-密度变化率依照Ficoll 400,泛影酸和氢氧化钠. -*分离溶液的密度为参照具体产品的标签
-生理学参数-在低粘度时高密度-无菌-即用型-溶液
产品规格
溶液 水
PH 7.0-7.5
渗透压 280-340mOsmol/kg
内毒素 <5EU/ml
无菌 已检测
保存期限 2 年
贮藏 +18℃-+25℃
注 意
TBD 实验室的细胞分离培养基是敏光型的。这种培养基在运输和贮藏过程中应避光保温。由于
各品牌离心机的性能不同,国内南北地区温度环境和四季的差异,可能影响分离效果,用户可以
调节离心转数,调节离心的时间,摸索*的分离条件(具体分离条件各实验室自定)。组织,
血液,细胞要求新鲜,避免冷冻和冷藏。
贮 藏
18-25℃避光保存。启封后置4℃保存。本品为真空包装,未启封前置于10℃ 以下易出现白色结
晶,影响分离效果。
通用型细胞分离液的比重调整:
制备几种不同的细胞分层液:40%、42.5%、45%、47.5% 、50%、52.5%、55%、57.5% 、60%、
62.5% 、65%、67.5%、70%、75%、80%
(0.1mol PBS PH:7.2 稀释配制)
40% LTS113分离液比重约为 : 1.0550
42.5% LTS113分离液比重约为 : 1.0580
45% LTS113分离液比重约为 : 1.0610
47.5% LTS113分离液比重约为 : 1.0650
50% LTS113分离液比重约为 : 1.0670
52.5% LTS113分离液比重约为 : 1.0700
55% LTS113分离液比重约为 : 1.0730
57.5% LTS113分离液比重约为 : 1.0760
60% LTS113分离液比重约为 : 1.0780
62.5% LTS113分离液比重约为 : 1.0800
65% LTS113分离液比重约为: 1.0830
67.5% LTS113分离液比重约为: 1.0850
70% LTS113分离液比重约为 : 1.0875
75% LTS113分离液比重约为 : 1.0920
80% LTS113分离液比重约为 : 1.1000