问题1.淋巴细胞分离液的温度对于分离的影响有多大，有无做过不同室温温度及不同液体温度下的分离效果验证？

淋巴细胞分离液由于配制时的环境温度即为20℃±2℃，保证该温度下分离液密度为1.077±0.001g/mL，分离液的作用原理：密度梯度分离，分离成功的关键即为正确的密度保证。温度和密度紧密，高温度下，分离液低密度；低温度下，分离液高密度，因此建议使用时，样品和分离液的温度均应为18℃-22℃之间。

建议： 使用时，环境、样品及分离液的温度控制均应在20℃±2℃

问题2.如何更好的提高血液分离效率，那些因素会导致提取效率过低？

影响因素：

ü样本新鲜程度：*分离时间为2h以内

ü血液稀释比例

ü所使用离心管直径高度：分离液和样本量在管中的高度不得超过管体积的2/3

ü分离液与样本的比例：分离液至少得和上样样本体积一致，分离液越多越好

ü血液个体差异问题

ü血液及分离液都不要经过冷藏及冷冻，且使用时的温度在18℃-22℃之间

离心力及离心时间

问题3.每个客户的离心机不同，是否可以使用统一的离心力提取细胞?如果使用统一的离心力提取淋巴细胞效果如何？

因为血液个体差异粘稠度、采血时间、血液量等，根据不同的因素来进行调整。可以统一离心力，但需根据个体差异略有改动。  

问题4.有一些的离心机有升速降速速率调节，如何来设定升速降速速率以保证能得到数量及纯度较高的PBMC（举例）？有一些普通的离心机没有升降速速率调节，PBMC层就就形成得不好，如何解决此类问题？

建议升速为1min，降速为3min分离效果理想。升降速时间不包含在离心时间里。

问题5.说明书上是针对骨髓、脐带血、外周血标本，我们在使用过程中还会遇到胸腹水、心包积液等体液标本，那对这类标本的分离没有特殊分离要求？

除血液样本以外，其他来源样本首先要富集样本中的细胞，要求细胞悬液浓度控制在2×108-1×109个/ml，效果*。

问题6.有一些标本本身淋巴细胞百分比就比较低，如何尽可能的提高得率或是有无方法去除掉一些其他不要的细胞？

要选择合适的试管、样本要2h以内进行分离，分离液使用量要多余样本量，以及离心力、离心时间、温度要合适等。

根据样本量制定的实验方案:

建议：分离液用量1:1是指与上样量1:1