本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大白鼠类风湿因子（RF）水平。用纯化的大白鼠类风湿因子（RF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入类风湿因子（RF），再与HRP 标记的类风湿因子（RF）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。

操作步骤

1、标准品的稀释：本大白鼠类风湿因子RF试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

40 U/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

20 U/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液

10 U/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液

0.5 U/L 2 号标品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液

0.25 U/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4、配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用。

5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，此重复5 次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7、温育：操作同3。

8、洗涤：操作同5。

9、显色：大白鼠类风湿因子RF每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟。

10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11、测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。