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发酵过程中活细胞浓度的测量

时间:2014-09-19      阅读:3691

发酵过程中,细胞浓度是一个非常重要的生理参数,不但可以计算比生长速率,底物消耗速率、生物量产率和维持系数等参数,还可以及时判断是否有染菌等异常情况发生。目前测量细胞浓度的方法主要有化学法(DNA/RNA分析)和物理法(干重、光密度、呼吸商等)两大类。一般来说,与物理法相比,化学法能较准确的测量有代谢活性的生物量,缺点是花费时间长,而利用物理法测量,无法区分处于悬浮状态的颗粒和微生物,也无法分别活死细胞。

实现在线活细胞浓度监测一直是发酵领域的热门话题,仅些年来出现了不少的测量方法,依据的工作原理也是五花八门,其中代表性的有声学,激光散色、荧光、核磁、量热或电容。其中法国fogale公司的测量仪器,以电容法为工作原理,直接将传感器安装与发酵罐上,可承受121℃高温灭菌,理论技术也比较成熟,是目前zui为理想的适合工业级别的在线活细胞传感器。

工作原理:

电容传感器采用活细胞的介电特性,实时连续测量活细胞的生物体积,可应用于实验室桌面型的反应器或者是工业规模的大型反应器

两对对电极位于传感器的顶部,一对用于在培养基中产生交变的电场,在电场范围内,带有完整细胞膜的细胞会在培养基中发生极化现象,发生极化的细胞可以认为是极小的电容,死细胞或者其他粒子没有完整的细胞膜,所以不能形成电容型号。另一对电极用于检测培养基中的介电信号,培养基中的介电信号和细胞的浓度是关联的。

细胞的极化率和电场的频率纯在函数关系,当频率增加时,培养基中细胞的介电常数由低频峰(zui大极化)降低到高频峰(zui小极化)。这种随频率增加极化率降低的现象称为β-散射。

传感器采用双频测量模式:培养基的基线在10MHz左右得到,细胞的信号在临界频率区域获得,在曲线的拐点,(动物细胞和细菌在1MHz,酵母在2MHz)我们获得了*的信号线性。

应用:

这项技术可广泛应用于各种细胞培养,生物发酵过程。已被文献证实可应用的细胞如下:

动物细胞:CHO, BHK, MDCK, PERC6, NSO, HEK, Hela, Hybridoma, Vero

    菌:E.Coli, Bacillus Thuringensis, Salmonella, Streptomyces, Lactic Bacteria

    母:Pichia Pastoris, Saccharomyces Cervisiae, Polymorpha Hasenula

昆虫细胞:sf9, Hi-5

    菌:Absidia

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