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原位杂交仪介绍及应用前景

时间:2014-09-05      阅读:1447

原位杂交仪简介:

将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,称为原位杂交。

使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置。

RNA原位核酸杂交又称RNA原位杂交组织化学或RNA原位杂交。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是:在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的RNA核苷酸片段,按核酸杂交中碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交),所形成的杂交体 (Hybrids)经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位杂交技术 经不断改进,其应用的领域已远超出DNA原位杂交技术。尤其在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析,已 成为zui有效的分子病理学技术,同时在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面已展示了分子生物学的一重要方向。

原位杂交仪的应用:

①细胞特异性mRNA转录的定位,可用于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究;

②感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位,如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测;

③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测;

④基因在染色体上的定位;

⑤检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等;

⑥分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定,某些肿瘤的诊断和生物学剂量测定等。

原位杂交仪的意义在哪里?

原位杂交:在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点,应用带有标记的(有放射性同位素,如3H、35S、32P、荧光素生物素、地gao辛等非放射性物质)DNA或RNApian段作为核酸探针,与组织切片或细胞内待测核酸(RNA或DNA)pian段进行杂交,然后可用放射自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的 mRNA或DNA 的存在并定位;用原位杂交技术,可在原位研究细胞合成某种多肽蛋白质的基因表达。此方法有很高的敏感性和特异性,可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

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