蛋白质盐析分离法介绍
时间:2015-07-14 阅读:1429
摘要 : 盐析的发生是由于盐浓度增大到一定数值时使水活性降低,导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和,水化膜逐渐被破坏,引起蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中析出,zui后经离心机分离后获得沉淀物和上清液。
一、蛋白质盐析分离的原理:
蛋白质在稀盐溶液中溶解度会随着盐浓度的增大而上升(盐溶),当盐浓度增大到一定数值时,其溶解度又逐渐下降直至蛋白质析出。盐析的发生是由于盐浓度增大到一定数值时使水活性降低,导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和,水化膜逐渐被破坏,引起蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中析出,zui后经离心机分离后获得沉淀物和上清液。
二、影响蛋白质盐析分离的因素:
1、蛋白质浓度:
蛋白质浓度过大,盐析时发生共沉现象,分离效果不好。蛋白质浓度太稀,耗盐量过大,蛋白质回收率低。一般蛋白质浓度在2.5%~3.0%较适中。
2、离子强度:
离子强度越大,蛋白质的溶解度越低,越容易产生盐析现象。
3、离子类型:
离子半径小而价数高的离子,对盐析影响较强。离子半径大而价数低的离子,对盐析影响较弱。
4、PH值:
蛋白质所带净电荷越多,溶解度越大。净电荷为零时,溶解度zui低。一般将PH值调到蛋白质等电点附近,这样有利于盐析。
5、温度:
低离子强度或水中,在一定范围内蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大。高盐溶液中,蛋白质的溶解度随着温度的升高有时反而下降。一般情况下在0~4℃操作。
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