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认识科研显微相机(二)

时间:2018-03-07      阅读:1061

    上期我们提到生命科学领域的显微科研相机主要分为CMOS, CCD, sCMOS, EMCCD几大类,根据应用的不同,我们可以选择对应的相机以满足实验需求。

 

    正置显微镜,只有明场观察的需求,比较典型的是H-E染色的切片。对于这类成像,zui简单也是zui有挑战的要求是:电脑屏幕上打开的显微照片的样品颜色,需要和显微镜目镜下显示的颜色*一致。因为某些病理研究,不同颜色对应的诊断结果也是不同的。由于明场下光线充足明亮,对于显微相机的灵敏度要求不高,CMOSCCD芯片都能满足,但是相机的色彩还原(color reproduction or color balancing)能力需要很高。大部分情况下,需要用自己的样品现场演示做比较,才能选出预算内且符合实验的CMOSCCD相机。

 

 

    倒置显微镜,只有明场相差观察的需求,比较典型的是细胞房里查看细胞状态的小倒置。这对这类成像,用户使用的痛点是细胞房的空间比较小,很多时候并不能再加一张桌子放电脑,需要尽量节约空间。同时,细胞的相差观察对灵敏度、色彩还原的要求没有H-E切片的要求高,所以采用CMOS芯片的一体触摸屏显微镜相机就可以满足需求。

 

 

    体视显微镜,只有透射或者反射明场观察的需求(上右图),类似以上正置和倒置显微镜的实验应用,如果对于色彩还原要求高的,可以考虑CCD芯片的显微相机,如果要求不高且实验室空间不大,CMOS一体机也是很不错的选择。

    正置或者倒置显微镜,对于明场和荧光的成像都有需求,比较典型的是院系或研究所的显微成像平台。这类成像,不仅明场图像的色彩还原要求高,而且荧光样品的亮度也是参差不齐,对于显微相机的灵敏度也有一定的要求。所以,同时具有彩色和单色CCD芯片的相机,可以更好地满足此类成像实验,保证采集到的不同样品的显微图像都是属于文献发表级别的。

 

 

    倒置显微镜,对于明场(相差或DIC)和荧光观察都有需求,比较典型的是细胞培养皿里的显微成像以及更的活细胞成像系统。这类显微成像,特点一是显微图像可以是单色的,特点二是荧光成像对于相机的灵敏度要求比较高。所以一般可以采用技术的sCMOS芯片的相机,比如400万像素(2048x2048sCMOS相机,配合半电动或全电动的倒置显微镜,可满足zui大范围的流程化、自动化活细胞显微成像实验。

 

 

    正置电生理膜片钳显微镜,对于明场红外DIC以及荧光有需求,由于红外DIC采用750nm或者900nm波长的红外光作为透射光源,需要相机芯片在这个波段有较好的灵敏度。大部分CCDCMOS的彩色和单色相机都不能很好地满足需求,传统上,神经科学实验室会使用一个模拟红外相机(640x480像素或更低)加上一个单色CCD相机做荧光成像,现在更别的sCMOS相机能同时满足红外DIC和荧光成像的需求,而且sCMOS还能实现更快速的荧光图像采集(2048x2048像素下100/秒),如上图。

 

    对于荧光信号非常弱的实验应用,比如单分子荧光、超分辨(PALM/STORM)、某些TIRF实验、钙火花/钙波、某些转盘共聚焦,需要采用灵敏度更高的电子倍增CCD(即EMCCD)相机,才能得到性噪比更好的显微荧光图像。

 

 

 

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