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超氧阴离子清除能力检测试剂盒

商品货号：MS1518
英文名称：Superoxide anion scavenging capacity Assay Kit
别名：超氧阴离子清除能力试剂盒 超氧阴离子清除能力测试盒
检测方法：微量法

• 产品详细介绍
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测定意义：

超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交链或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。

测定原理：

AP-TEMED系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO2－与对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的清除能力与530nm的吸光值呈负相关。

• 产品说明书

货号：MS1518                                      规格：100 管/96 样

超氧阴离子清除能力试剂盒说明书 微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、 蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交链或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体 衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。

测定原理：

AP-TEMED 系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成 NO₂^－，NO₂^－与对氨基苯磺酸和 α － 萘胺的作用生成红色的偶氮化合物，在 530nm 处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的清除能力 与 530nm 的吸光值呈负相关。

自备实验用品及仪器：

天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水 浴锅。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 1.5mL×1 支，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 6mL 蒸馏水充分溶解。

试剂三：液体 7.5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 7.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂五：液体 7.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

样品处理：

1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提 取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 10min，取上清置于冰上待测。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细 胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）； 然后 4℃，10000g 离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 培养液或其它液体：直接检测。

4. 粉剂药物可配制成相同浓度，比如 1mg/mL。 

测定操作：

              空白管   对照管   测定管

试剂一（μ L）     10      10       10

试剂二（μ L）            40       40

H2O（μ L）       65      25

        充分混匀，25℃反应 1min

样品（μ L）                     25

试剂三（μ L）     50      50      50

试剂四（μ L）     50      50       50

试剂五（μ L）     50      50      50

          充分混匀，37℃显色 20min，于微量石英比色皿/96 孔板，以空白管调零，在 530nm 处测定对             照管和测定管的吸光值，分别记为 A 对照管和 A 测定管。 

注意：空白管只需测定一次。 

计算公式：

超氧阴离子清除率 I%= (A 对照管 - A 测定管) / A 对照管  x100% 

注意事项：

1. 试剂一 4℃可保存 2 个月，配制好的试剂二 4℃可保存一周，建议实验前配制，并尽快使用。

2. 样品处理完后立即进行测定，或者低温保存不超过 24 小时。

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