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TEV重组型蛋白酶相关小知识

时间:2021-04-06      阅读:3556

   蛋白酶是催化蛋白质水解的一类酶,是酶学研究中较早也是最深入的一种酶。重组TEV蛋白酶(GST标签)是烟草花叶病毒小核体蛋白a催化结构域基因编码的经高度纯化的制剂,该酶的生物学功能是在病毒产生过程中将多蛋白体酶解为单一蛋白。
  和因子Xa、凝血酶相比,TEV酶是识别序列更加严格。做为生物工程下游技术中融合蛋白酶切使用的重要工具酶,TEV酶识别非常一致的7氨基酸序列:E-Xaa-Xaa-Y-Xaa-Q-P1’(G/S),酶切发生在Q和P1’之间的肽键。常用的7氨基酸序列是ENLYFQG。P1’位置可以是不同的小分子氨基酸,这样目标蛋白从融合蛋白的N端释放,带自然的N末端或者只多一个氨基酸的蛋白。该产品是经过了基因工程改造的蛋白酶,稳定性好,在广泛的温度范围具有特异性。本品来源于重组大肠杆菌,经过高度纯化,比活性达到10,000U/mg。最适酶切温度是30℃,但在4℃也具有酶活性。rTEV-H带His标签,酶切后可方便地通过谷胱甘肽亲和柱层析去除。酶切的条件比如:温度、pH、DTT等可根据具体蛋白进行优化。
  活性单位:
  一个酶活性单位定义为在4℃,pH8.0条件下,12~16小时在酶切反应缓冲液中将5μg融合蛋白95%酶切所需要的酶量。
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