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看完本篇你就会对TEV重组型蛋白酶有更多了解

时间:2023-06-02      阅读:2391

  TEV重组型蛋白酶是一种常用的蛋白酶,用于在蛋白质表达和纯化过程中切割目标蛋白的亚细胞定位肽或亲和标签。在此文章中,我们将探讨TEV重组型蛋白酶的起源、结构和应用方面。
 
  TEV全称为烟草花叶病毒(Tobacco Etch Virus)编码的蛋白酶,其天然形式被广泛分布于植物体内,能够剪切寄生于植物细胞内的RNA病毒基因组。人工合成的TEV重组型蛋白酶出现于1995年,由加拿大多伦多大学的Brian Seed教授及其同事开发制备,能够特异性地识别和切割TEV蛋白外壳上的底物序列。随后,该产品被广泛运用于蛋白质表达和纯化中,成为生物技术领域的重要工具之一。
 
  该产品的结构与活性机理已经被详细研究。它是一种由27kDa蛋白质构成的单亚单位酶,具有切割底物序列ENLYFQ/G的特异性。其结构包括一个N末端区域、一个中央峡谷和一个C末端区域。中央峡谷是TEV重组型蛋白酶与其底物序列结合的关键部位,其中含有两个天然氨基酸残基草酰胺和谷氨酰胺,能够与底物序列内的丙氨酸和天冬氨酸发生水解反应,从而使目标蛋白被切割成为两段。
 

 

  在蛋白质表达和纯化过程中,该产品常用于清除亲和纯化标签或者亚细胞定位肽,从而得到纯净的目标蛋白。例如,在重组蛋白表达系统中,可以将目标蛋白与亲和标签如GST等融合表达,并在蛋白纯化后进行TEV酶切割,以去除标签;在细胞定位研究中,可以将荧光蛋白和其它亚细胞定位肽融合表达,然后用TEV酶去除亚细胞定位肽,以实现对荧光蛋白真正的定位。此外,该产品还可用于破坏蛋白质-蛋白质相互作用,或者在结构生物学中用于切割蛋白晶体以便进行X射线衍射分析。
 
  综上所述,TEV重组型蛋白酶是一种常用的蛋白酶,其起源于植物病毒,结构特异性地识别和切割底物序列ENLYFQ/G。在蛋白质表达和纯化、蛋白质相互作用
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