用于检测未知抗原的双抗体夹心法
时间：2012-06-04 阅读：2490
用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1. 包被：用0.05M pH9.5碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含
量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，
4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分
钟。（简称洗涤，下同）。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，
置37℃孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳
性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的
稀释度）0.1ml，37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液
0.1ml，37℃孵育10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜
色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色
的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测
仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调
零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为
阳性。