此说明仅限参考

葡聚糖凝胶G系列使用说明

1 化学和物理性质

葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。亲水基质使其非特异性吸附最小化，并在生物分子分离期间得到较高的回收率。G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。

2 产品说明

3 使用方法

Sephadex系列产品以干粉形式存在，使用前必须溶胀，在膨胀期间应避免过度搅拌，因为它可能破坏填料，不要使用磁力搅拌器。

3.1 填料的准备

（1）将填料在过量去离子水或缓冲液中，室温条件下溶胀24小时，或用热水溶胀1小时（不要水浴）。洗脱缓冲液不应含有高粘度的试剂。溶胀过程中，如果上层有漂浮物，请去除。

（2）将溶胀好的填料，所有的缓冲液等材料平衡至实验操作温度，对所有的缓冲液进行脱气处理。

3.2 装柱

（1）检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。

（2）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。

（3）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

（4）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。

3.3平衡

上样前平衡层析柱至少5-10个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的pH值和电导值等于上柱的Buffer的pH值和电导值）。

3.4 上样

样品一定要离心或过滤后（0.45um滤膜）上样。

凝胶过滤的上样量一般为不大于5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的柱床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱子越高，分离效果相应越好，但是，柱高过高的凝胶柱会引起较大的反压，也应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1即可。

3.5 洗脱方法

     可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱。

3.6 在位清洗（CIP）

如果填料性能发生改变，诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过程中洗脱不下来，则需要通过在位清洗程序CIP来清除。方法是用0.1 M氢氧化钠在位清洗2-5个柱体积，随后立即用大量纯水*清洗直至中性。

4保存

    未处理的填料，室温密闭保存。使用完的填料，用纯水将盐分*冲洗，最后保存在20%乙醇中，4℃保存。

5 注意事项：

（1）上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。所有的缓冲液均需要用0.45um的过滤器过滤。

    （2）在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于0.1摩尔。碱会使流速变慢。

    （3）不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。