超微量光度法的应用
时间:2021-10-19 阅读:1365
超微量光度法的应用:
定义: 超微量分光光度法是利用物质所*的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的分析检测技术。
特点: 灵敏、快速和简便,在复杂组分系统中,不需要分离,即能检测出其中所含的极少量物质。
应用: 生物化学研究中广泛使用的方法之一,广泛用于糖,蛋白质,核酸,酶等的快速定量检测
超微量分光光度计的光谱范围
包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。不同的光源都有其*的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。
钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的380~820nm波长的光谱,光通过三棱镜折射后,可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源。
氘灯的发射光谱:氘灯能发出190~400 nm波长的光谱,可作为紫外光光度计的光源。 氙气闪光灯的发射光谱:氙灯能发出200~850 nm波长的光谱,可作为紫外-可见光光度计的光源。电源体积较小,采用脉冲闪光方式工作,闪光次数可达109次,寿命相对氘灯和钨灯较长。
物质的吸收光谱
如果在光源和棱镜之间放上某种物质的溶液,此时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱,它出现了几条暗线,即光源发射光谱中某些波长的光因溶液吸收而消失,这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收光谱。
不同物质的吸收光谱是不同的。因此根据吸收光谱,可以鉴别溶液中所含的物质。
原理
当光线通过某种物质的溶液时,透过的光的强度减弱。因为有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被组成此溶液的物质所吸收,只有一部分光可透过溶液。
入射光 = 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透过光
如果我们用蒸馏水(或组成此溶液的溶剂)作为“空白”去校正反射、分散等因素造成的入射光的损失,则:
入射光 = 吸收光 十 透过光
分光光度计进行样品浓度测定的原理是根据朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律,
A = ε b c
其中,A ——为物质的吸光度;
ε——为物质的吸光系数;
b——为光路长度(光程);
c——为物质的浓度。