总黄qu霉毒素检测试剂盒

总黄qu霉毒素检测试剂盒

本测试盒用间接竞争免疫分析法定量测定谷物中总黄qu霉毒素。该测试盒反应孔可拆卸，可测单份样品，也可测多份样品。定量分析时需有含450nm波长的微孔板酶标仪。

1 概要
黄qu霉毒素是由qu霉菌属的黄qu霉和寄生qu霉等产生的次级代谢产物。主要污染玉米、花生、坚果等。天然污染的黄qu霉毒素以AFB1、AFB2、AFG1、AFG2为主，总黄qu霉毒素一般指这四种毒素的总量。黄qu霉毒素属于z强烈的天然致癌物质，肝脏是其主要的靶器官，其中AFB1毒性z强，具有*的急性du性和致ai性。其检测方法主要有薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC），本试剂盒可以准确快速检测粮谷类和花生及饲料中的总黄qu霉毒素。

2 测定原理
本测试盒用固相酶联免疫吸附原理，利用间接竞争ELISA法进行测定。用抗原包被微孔板，加入黄qu霉毒素B1标准品或样品、总黄qu霉毒素单克隆抗体进行免疫反应后，将未与包被抗原结合的抗体洗去；再加入酶标记的抗鼠IgG抗体孵育，加入底物显色，终止液终止后，用酶标仪在450nm处测定OD值。

3 提供的试剂及材料
微孔板………………………………………………………………………… 包被有AFB1-BSA
5个浓度的AFB1标准溶液各（1mL）……………………………………………直接使用
标准1：0ng/mL    …………………………………………………………….直接使用
标准2：1.0ng/mL    …………………………………………………………….直接使用
标准3：2.0ng/mL    …………………………………………………………….直接使用
标准4：5.0ng/mL    …………………………………………………………….直接使用
标准5：10.0ng/mL    ……………………………………………………….直接使用
AFS单克隆抗体溶液（6mL）……………………………………………………..直接使用
酶标物（12mL）. ……………………………………………………………………..直接使用 
显色液（12mL）….. .….. .….. .….. .….. .….. ………………………………….........直接使用
终止液（6mL）……. .….. .….. ………………………………………………………直接使用
浓缩洗液（30mL） ...….……….….. .….. .….. ………………………………………稀释使用
空白对照（6ml）……………………………………………………………………直接使用

4 盒中未提供，需自备物品
4.1 设备
微孔板酶标仪（含450nm）：定量分析用
振荡器，粉碎机，微量移液器，量筒，漏斗和容量瓶，快速定性滤纸
4.2 试剂
氯化钠（分析纯）
甲醇（分析纯）
去离子水或蒸馏水

5 操作者注意事项
----标准溶液中含有黄qu霉毒素，应特别小心。
----使用过的玻璃容器及黄qu霉毒素溶液用pH7的次氯酸溶液（10%v/v）浸泡过夜。
----终止液为0.5N硫酸，避免接触皮肤。
----不要使用过了有效日期的试剂盒。
----不要交换使用不同批号盒中的试剂。

6  储存条件
----保存试剂盒于2-8℃。不要冷冻
----显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
----将不用的微孔板放进原锡箔袋中，置2-8℃保存。

7 试剂变质的标志
----0ng/mL标准的吸光度值小于0.5个单位 （A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

8 样品处理 
样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存
----取5g粉碎的有代表性的样品，加1.25g氯化钠及25mL70% 甲醇-水
----强力振荡3分钟
----用快速定性滤纸过滤
----取1mL滤液，用1%氯化钠溶液稀释10倍
----取50μL稀释液进行分析
*根据需要可以增加样品量，但甲醇溶液的量也应相应增加。 

9  酶标免疫分析程序
9.1注意事项
1.    每次加样后立即将所有试剂放回2-8 ℃
3. 每步操作时间控制在5min内。
4. 孵育过程中应避光。

9.2 试剂稀释
1. 浓缩洗液：使用时用去离子水或蒸馏水与本浓缩液按体积比9:1稀释。

9.3 测定程序
1. 取所需数量的板条插入微孔架，记录样品及标准的位置。
2. 加入50mL标准品或处理好的样品到微孔，每个标准和样品必须使用新的吸头。
3. 将50mL抗总黄qu霉毒素单克隆抗体使用液加入到每个微孔（注意移液器管尖不要接触到放进孔中的液体，避免交叉污染），在适当位置孔加空白对照液100mL，37℃孵育90min。
4. 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板3min×3次，z后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。
5. 每孔加入酶标物100mL，37℃孵育60min。
6. 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板3min×3次，z后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。
7. 每孔加入显色液100mL（2滴），37℃孵育10 min -12min。
8. 每孔加入终止液50mL（1滴），立即用酶标仪在波长为450nm处测定吸光度值（OD值）。

10 样品浓度计算
以标准溶液OD值与*个标准（0ng/mL）OD值的比值为纵坐标，所对应标准溶液浓度（ng/mL）的对数值为横坐标，制作标准曲线。根据样品OD值与0ng/mL标准OD的比值，从曲线上得到对应点的横坐标，即为AFs浓度的对数值，求得反对数即为测定液中AFs浓度C（ng/mL），按下列公式计算出样品中AFs含量：
AFs含量（mg/kg）= C×K
式中：C：测定液中AFs浓度（ng/mL）
            K: 测定液对样品的稀释倍数（本提取方法为50）

11试剂盒主要技术指标及参数
 测试盒z低检出浓度1.0ng/mL，回收率70%-120%，交叉反应系数小于1%，试剂盒校正曲线的线性范围1.0ng/mL -10.0ng/mL，试剂盒条内变异＜10%，条间变异＜15%。